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上海宇淳生物科技有限公司

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土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶試劑盒
土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶試劑盒
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【簡單介紹】
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土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶試劑盒
土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶與土壤總碳、全氮、全磷等土壤養(yǎng)分指標間關(guān)系密切

土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶試劑盒

土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤熒光素二乙酸酯(Fluorescein diacetate,FDA)水解酶試劑盒說明書 (貨號:WS2230F 分光法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡介: 土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶與土壤總碳、全氮、全磷等土壤養(yǎng)分指標間關(guān)系密切, 與微生物活性間的相關(guān)性比其他酶活性更顯著,同時也能夠很好地反映系統(tǒng)中有機質(zhì)的轉(zhuǎn) 化和土壤中微生物的活性,是土壤健康質(zhì)量的微生物學指標之一。 FDA 是一種無色化合物,在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解,并經(jīng)脫水反應(yīng),產(chǎn)生 酶解終產(chǎn)物—熒光素,該黃色產(chǎn)物在 490nm 處有強吸收峰,通過檢測 490nm 處的吸光值 變化即可得出 FDA 水解酶活性。 二、試劑盒組分與配制 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 110mL×1 4℃保存 試劑二 粉體 mg×1 4℃保存 臨用前加 3mL 丙酮充分溶解備用 標準品 粉體 mg×1 4℃保存 若重新做標曲,則用到該試劑 三、所需的儀器和用品: 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、可調(diào)式移液器、天平、低溫離心機、 恒溫水浴鍋、丙酮。 四、FDA 水解酶(FDA)活性測定: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、樣本處理: 取新鮮土樣風干或 37℃烘箱風干,先粗研磨過 40 目篩備用。 [注]:土壤風干,減少土壤中水分對于實驗的干擾;土壤過篩,保證取樣的均勻細膩; 2、上機檢測: ① 可見分光光度計預熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 490nm,蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(μL測定管 對照管 土樣(g0.05 0.05 試劑一 1000 1000 試劑二 50 丙酮 50 混勻,37℃反應(yīng) 1h 丙酮 150 150 混勻, 12000 rpm 離心 10min,取全部上清液轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃 比色皿中,于 490nm 下讀取吸光值 A,ΔAA 測定-A 對照。 【注】:若ΔA 的差值較大,超過 1.5,可以降低土壤取樣量,或者反應(yīng)產(chǎn)物用蒸餾水稀釋之后 再檢測,則稀釋倍數(shù) D 代入計算公式。 五、結(jié)果計算: 1、標準曲線:y = 0.1614x + 0.009x 為標準品質(zhì)量(μg),y ΔA。本試劑盒僅供科研使用 2、活性定義:每小時每克土樣中產(chǎn)生 1μg 熒光素定義為一個酶活力單位。 FDA 活性(μg/h/g)= (ΔA -0.009)÷0.1614÷W÷T×D= 6.2×(ΔA -0.009)÷W×D T---反應(yīng)時間,1h; W---土壤樣本實際取樣量; D---稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1; 熒光素分子量---332.31。 附:標準曲線制作過程: 1 制備標準品母液(5μmol/mL):向標準品 EP 管里面加入 1 mL 丙酮溶解,再加 1 mL 水(母液需在兩天內(nèi)用且-20℃保存)。 2 把母液用試劑一稀釋成六個濃度梯度的標準品:0, 0.2,0.4 ,0.6 , 0.8, 1. μmol/mL。也 可根據(jù)實際樣本來調(diào)整標準品濃度。 3 按照 20μL 標準品+1mL 試劑一+180μL 丙酮的體系來操作,依據(jù)結(jié)果即可制作標準 曲線。 2



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