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上海宇淳生物科技有限公司

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土壤淀粉mei試劑盒,微板法
土壤淀粉mei試劑盒,微板法
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【簡單介紹】
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土壤淀粉mei試劑盒,微板法
土壤中的淀*酶主要來自于微生物,是一種重要的酶制劑。淀*酶可水解淀粉產(chǎn)生還原 糖

土壤淀粉mei試劑盒,微板法

土壤淀粉mei試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤淀*酶(Soil Amylase,S-AL)試劑盒說明書 (貨號:WS8130W 微板法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡介: 土壤中的淀*酶主要來自于微生物,是一種重要的酶制劑。淀*酶可水解淀粉產(chǎn)生還原 糖,本試劑盒采用 3,5-二硝基水楊酸與終產(chǎn)物還原糖反應(yīng)生成棕紅色物質(zhì),在 540nm 處有 特征吸收峰,進而得到土壤淀*酶活性。 二、測試盒組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉體 mg×1 4℃保存 臨用前加入 60ml 試劑二,80℃水浴, 攪拌至溶解,待用。 試劑二 液體 120mL×1 4℃保存 試劑三 液體 12mL×EP 4℃保存 標準品 粉劑 mg×1 4℃保存 若重新做標曲,則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品: 酶標儀、96 孔板、天平、水浴鍋、低溫離心機、甲苯。 四、土壤淀*酶(S-AL)活性檢測: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、樣本處理: 取新鮮土樣或風(fēng)干土壤,先粗研磨,過 40 目篩網(wǎng),待測備用。 【注】:土壤風(fēng)干,減少土壤中水分對于實驗的干擾;土壤過篩,保證取樣的均勻細膩; 2、上機檢測: ① 培養(yǎng):在 EP 管依次加入: 試劑(μL測定管 對照管 土樣(g0.1 0.1 甲苯 40 40 25℃靜置 15min 試劑一 1000 試劑二 1000 充分混勻,37℃培養(yǎng) 1h,12000rpm,25℃離心 10min,上清液待用 ② 酶標儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長為 540nm。 ③ 顯色反應(yīng):在 EP 管中依次加入: 上清液 200 200 試劑三 100 100 混勻,95℃水浴 5min,待冷卻后,取 200μL 96 孔板中, 540nm 處讀取吸光值 A,△A=A 測定管-A 對照管。 【注】若A 在零附近徘徊,可增加土樣質(zhì)量(如增至 0.2g),或延長培養(yǎng)時間(如增至 3h 或更長), 則改變后的土樣質(zhì)量和反應(yīng)時間 T 代入公式重新計算。 五、結(jié)果計算: 1、標準曲線方程:y = 2.5454x - 0.0704;x 為標準品質(zhì)量(mg/mL,y A。本試劑盒僅供科研使用 2、酶活單位定義:每克土樣每小時催化生成 1μg 葡萄糖為一個酶活力單位。 S-AL(μg/h/g 土樣)=[(A+0.0704)÷ 2.5454×103×V]÷W÷T =408.6×(A+0.0704)÷W V---反應(yīng)總體積,1040μL=1.04mLT--反應(yīng)時間,1hW--土壤樣本實際取樣量,g; 附:標準曲線制作過程: 1 制備標準品母液(1mg/mL):從標準品管中稱量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL 蒸餾水混勻溶解即 1mg/mL 的葡萄糖(母液需在兩天內(nèi)用且-20℃保存)。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個濃度梯度的標準品:0, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. 0.6. 0.7.mg/mL。 也可根據(jù)實際樣本來調(diào)整標準品濃度。 3 在顯色反應(yīng)階段,按照測定管加樣表操作,依據(jù)結(jié)果即可制作標準曲線。 2



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