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土壤過(guò)氧化物酶(S-POD)試劑盒,微板法
土壤過(guò)氧化物酶(S-POD)試劑盒,微板法
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更新時(shí)間:2024-06-06 16:08:59瀏覽次數(shù):253

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土壤過(guò)氧化物酶(S-POD)試劑盒,微板法
土壤過(guò)氧化物酶(S-POD)主要來(lái)源于土壤微生物,能夠氧化土壤有機(jī)物質(zhì)產(chǎn)生過(guò)氧 化物,在腐殖質(zhì)的形成過(guò)程中具有重要作用。

土壤過(guò)氧化物酶(S-POD)試劑盒,微板法

土壤過(guò)氧化物酶(S-POD)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤過(guò)氧化物酶(Solid- PeroxidaseS-POD)試劑盒說(shuō)明書(shū) (貨號(hào):WS7130FW 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介: 土壤過(guò)氧化物酶(S-POD)主要來(lái)源于土壤微生物,能夠氧化土壤有機(jī)物質(zhì)產(chǎn)生過(guò)氧 化物,在腐殖質(zhì)的形成過(guò)程中具有重要作用。 土壤過(guò)氧化物酶(S-POD)在過(guò)氧化氫存在下催化底物左*多巴產(chǎn)生紅色的醌類(lèi)物質(zhì), 依據(jù)文獻(xiàn)選擇該有色產(chǎn)物在 475nm 做為特征光吸收波長(zhǎng),通過(guò)測(cè)定進(jìn)而計(jì)算得出土壤過(guò) 氧化物酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱(chēng) 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 110mL×2 4℃保存 試劑二 粉體 mg×3 4℃保存 臨用前甩幾下使粉劑落入底部,每瓶 加入 30mL 試劑一,超聲溶解,溶解 后的試劑三天內(nèi)用完。 試劑三 液體μL×1 4℃保存 臨用前甩幾下使液體落入底部,取出 60μL 至新 EP 管中并再加 1.5mL 的蒸 餾水,混勻備用,三天內(nèi)用完。 三、所需的儀器和用品: 酶標(biāo)儀、96 孔板、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫振蕩培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器。 四、土壤過(guò)氧化物酶(S-POD的測(cè)定: 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)! 1、樣本制備: 取新鮮土樣或風(fēng)干土壤,先粗研磨,過(guò) 40 目篩網(wǎng),待測(cè)備用。 2、上機(jī)檢測(cè): ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 475nm。 ② 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(chēng)(μL測(cè)定管 對(duì)照管 土樣(g0.1 0.1 試劑一 160 960 試劑二 800 試劑三 40 40 振蕩混勻,25℃水?。ㄩg隔 10min 振蕩混勻幾下)或者恒溫振蕩培 養(yǎng)箱振蕩孵育 1 h 孵育結(jié)束后立即于 4℃(需低溫)12000rpm 離心 5min,取 200μL 上清液于 96 孔板中,于 475nm 處讀取吸光值 A,A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管(每個(gè)樣本需做一個(gè)自身對(duì)照)。 【注】:1. A 測(cè)定大于 1.8,可用蒸餾水對(duì)離心后待檢測(cè)的上清液進(jìn)行稀釋?zhuān)瑒t稀釋倍數(shù) D 需代入公 式重新計(jì)算。 2. A 值小于 0.01,可延長(zhǎng) 25的孵育時(shí)間 T(如由 1h 可增加至 4h),則改變后的 T 需代入 公式重新計(jì)算。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計(jì)算: 1、單位定義:每小時(shí)每克土壤中產(chǎn)生 1nmol 紅色產(chǎn)物定義為一個(gè)酶活力單位。 S-POD 活力(nmol/h/g 土樣)=[ΔA÷(ε×d)×V1×109]÷W÷T×D=540.5×A÷W×D ε---紅色產(chǎn)物摩爾吸光系數(shù),3.7×103 L/mol/cm; T---反應(yīng)時(shí)間,1h; V1---反應(yīng)總體積,1000μL=1mL=1×10-3 Ld---光徑,0.5cmD---稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1; W---土壤樣本實(shí)際取樣量,g



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