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土壤葡萄糖苷酶纖維二糖酶試劑盒微板法
土壤葡萄糖苷酶纖維二糖酶試劑盒微板法
參考價(jià)1050-1790
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更新時(shí)間:2024-06-06 15:21:39瀏覽次數(shù):205

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土壤葡萄糖苷酶纖維二糖酶試劑盒微板法
土壤β-葡萄糖苷酶(β-GC,EC 3.2.1.21)能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團(tuán)之間 的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖維素分解酶系中重要組成成分之一

土壤葡萄糖苷酶纖維二糖酶試劑盒微板法

土壤葡萄糖苷酶纖維二糖酶試劑盒微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC)試劑盒說(shuō)明書 (貨號(hào):WS2130W 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介: 土壤β-葡萄糖苷酶(β-GC,EC 3.2.1.21)能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團(tuán)之間 的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖維素分解酶系中重要組成成分之一,在土壤微生物的糖類代 謝方面具有重要生理功能。 土壤β-葡萄糖苷酶能夠催化對(duì)-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成黃色物質(zhì)對(duì)-硝基*酚 PNP),該物質(zhì)在 405nm 有特征光吸收,進(jìn)而得到土壤β-葡萄糖苷酶的活性。 二、試劑盒的組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉劑 mg×2 -20℃保存 臨用前加入 8mL 蒸餾水,充分溶解備 用,用不完的試劑仍-20℃保存; 試劑二 液體 80mL×1 4℃保存 試劑三 液體 80mL×1 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑×1 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,則用到該試劑 三、所需的儀器和用品: 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫振蕩培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、天平。 四、土壤β-葡萄糖苷酶(S-β-GC)酶活檢測(cè): 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)! 1、樣本處理: 取新鮮土樣或干土(風(fēng)干或者 37 度烘箱風(fēng)干),先粗研磨,過(guò) 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】:土壤風(fēng)干,減少土壤中水分對(duì)于實(shí)驗(yàn)的干擾;土壤過(guò)篩,保證取樣的均勻細(xì)膩; 2、上機(jī)檢測(cè): ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 405nm② 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(μL測(cè)定管 對(duì)照管 空白管(僅做一次) 土樣(g0.05 0.05 試劑一 150 150 蒸餾水 150 試劑二 300 300 300 混勻, 37℃振蕩反應(yīng) 1h 試劑三 350 350 350 混勻,12000rpm 室溫離心 10min,取上清液 200μL 96 孔板中, 405nm 下讀取吸光值 A,A=A 測(cè)定- A 對(duì)照-A 空白(每個(gè)樣本 做一個(gè)自身對(duì)照)。 【注】:1.ΔA 在零附近徘徊,可延長(zhǎng) 37℃的孵育時(shí)間 T(如增至 4 小時(shí)或更長(zhǎng)),或增加土樣質(zhì) W(如增至 0.2g)。則改變后的 T W 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 2.若測(cè)定管 A 值大于 1.5 A 大于 1.5,可縮短 37℃的孵育時(shí)間 T(如減至 0.5 小時(shí)或更短)。 則改變后 T 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算?;?qū)ψ詈笠徊降拇龣z測(cè)上清液(包括測(cè)定管、對(duì)照管 和空白管)同時(shí)用蒸餾水進(jìn)行稀釋,稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計(jì)算: 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 y = 0.0965x + 0.005;x 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量(μg),y A。 2、單位定義:每小時(shí)每克土樣中產(chǎn)生 1nmol 對(duì)-硝基*酚(PNP)定義為一個(gè)酶活單位。 S-β-GC 活力(nmol/h/g 土樣)=(ΔA-0.005) ÷0.0965÷Mr×103÷W÷T×D =74.5×(ΔA-0.005)÷W×D T---反應(yīng)時(shí)間,1h; W---實(shí)際稱取土樣質(zhì)量,g; Mr--- PNP 相對(duì)分子質(zhì)量,139.11; D---稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1。 附:標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程: 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液(1mg/mL):向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 1mL 蒸餾水。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 mg/mL。也可根據(jù)實(shí)際 樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 EP 管中依次加入:20μL 標(biāo)準(zhǔn)品+130μL 蒸餾水+300μL 試劑二+350μL 試劑三,混 勻,取 200μL 96 孔板中,于 405nm 下讀取吸光值。 4 根據(jù)結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。



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