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土壤過(guò)氧化氫酶(S-CAT)試劑盒,微板法

土壤過(guò)氧化氫酶(S-CAT)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤過(guò)氧化氫酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說(shuō)明書(shū) (貨號(hào)：WS3030W 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 土壤過(guò)氧化氫酶主要分解土壤中的過(guò)氧化氫，降低土壤中過(guò)度累積的過(guò)氧化氫對(duì)植物根 系的危害。本試劑盒提供一種簡(jiǎn)單，靈敏，快速的測(cè)定方法，即 CAT 催化過(guò)氧化氫產(chǎn)生水 與氧氣，剩余的過(guò)氧化氫與一種高靈敏顯色探針?lè)磻?yīng)生成有色物質(zhì)，其在 510nm 左右有最 大吸收峰。通過(guò)過(guò)氧化氫的減少量來(lái)計(jì)算土壤中 CAT 酶的活力。 本試劑盒突出特點(diǎn)是從紫外波長(zhǎng)（240nm：過(guò)氧化氫的檢測(cè)波長(zhǎng)）轉(zhuǎn)換到可見(jiàn)波長(zhǎng) （510nm）檢測(cè)，無(wú)需使用石英比色皿或 UV 板。而且由于過(guò)氧化氫極其不穩(wěn)定，直接檢 測(cè)造成讀值不穩(wěn)定，且蛋白質(zhì)等組分在此紫外波長(zhǎng)下也有光吸收，影響結(jié)果精確性。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格試劑名稱 保存要求 備注 試劑一 液體×1 支 4℃保存 用前甩幾下或者離心使試劑落入底 部，分別取出 40μL 至六個(gè)新的 EP 管 中，再加 2mL 蒸餾水充分溶解備用。 試劑二 液體 22mL×1 瓶 室溫 試劑三 液體 35mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 7mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 液體 1.5mL×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、蒸餾水。 四、土壤過(guò)氧化氫酶（Solid-Catalase，S-CAT）活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣風(fēng)干或者 37 度烘箱風(fēng)干，先粗研磨，過(guò) 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】：土壤風(fēng)干，可減少土壤中水分對(duì)于實(shí)驗(yàn)的干擾；；土壤過(guò)篩，保證取樣的均勻細(xì)膩； 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 510nm。 ② 試劑一事先按照試劑配制要求配制好，再進(jìn)行以下操作。 [建議]：若一次性樣本較多，離心數(shù)量有限，可分批操作，待一批樣本加完試劑二開(kāi)始離心時(shí)，再 進(jìn)行下一批操作（土壤樣本可一次性稱完，分批按照加樣表操作）。 ③ 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（µL） 測(cè)定管 無(wú)基質(zhì)管 無(wú)土管 （僅做一次） 土樣（g） 0.1 0.1 蒸餾水 800 800 800 室溫（25℃）震蕩（如：搖床）培養(yǎng) 30min， 試劑一 100 100 蒸餾水 100本試劑盒僅供科研使用 2 ④ 顯（粉）色反應(yīng)：在 96 孔板中依次加入： 【注】：1. 無(wú)土管的顏色最深，若測(cè)定管顏色很淺接近無(wú)色，說(shuō)明樣本里面過(guò)氧化氫酶含量很高，則震蕩 10min 的時(shí)間縮短（如 5min）或減少土壤取樣質(zhì)量 W。則改變后的 T 和 W 重新代入公式計(jì)算。 2. 若一次性檢測(cè)樣本較多，在顯色反應(yīng)階段可酌情分批操作和讀值，為保證數(shù)據(jù)的精確性，顯色 反應(yīng)階段半個(gè)小時(shí)內(nèi)完成。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.1027x - 0.0318；x 為標(biāo)準(zhǔn)品摩爾質(zhì)量（µmol），y 為△A。 2、單位定義：每小時(shí)每克土樣催化 1µmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。 S-CAT(µmol/h/g 土樣)=[(△A+0.0318)÷0.1027]÷W÷T=58.4×(△A+0.0318)÷W T---反應(yīng)時(shí)間，10min=1/6h； W---土壤樣本實(shí)際取樣量。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程： 1 把標(biāo)準(zhǔn)品（100µmol/mL）稀釋成六個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 20, 40, 60, 80, 100. µmol/mL。也可根據(jù)實(shí)際樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 2 按照無(wú)土管加樣順序（100µL 試劑一換成 100µL 標(biāo)準(zhǔn)品，其他不變）依次加入試劑 測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)品的摩爾質(zhì)量作為橫坐標(biāo)，吸光值作為縱坐標(biāo)，即得標(biāo)準(zhǔn)曲線。 混勻，室溫（25℃）10min（務(wù)必每隔 2min 搖晃一次）。 試劑二 100 100 100 12000rpm，4℃或室溫離心 10min，上清液務(wù)必全部轉(zhuǎn)移至新的 EP 管 中，待測(cè)。 上清液 5 5 5 試劑三 165 165 165 試劑四 30 30 30 室溫（25℃）靜置 5min，務(wù)必立即在 510nm 下讀取吸光值 A， △A=A 無(wú)土管-（A 測(cè)定管-A 無(wú)基質(zhì)管）。