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NADPH-谷an酸脫氫酶(NADPH-GDH)試劑盒
NADPH-谷an酸脫氫酶(NADPH-GDH)試劑盒
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更新時間:2024-06-04 10:27:22瀏覽次數(shù):353

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【簡單介紹】
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NADPH-谷an酸脫氫酶(NADPH-GDH)試劑盒
谷*酸脫氫酶廣泛分布于生物體中,在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作 用。其輔酶是 NADPH 或 NADH,在動植物種兩種輔酶都有存在,在酵母中主要是 NADPH -谷*酸脫氫酶(EC 1.4.1.4)。

NADPH-谷an酸脫氫酶(NADPH-GDH)試劑盒

NADPH-谷an酸脫氫酶(NADPH-GDH)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 NADPH-谷*酸脫氫酶(NADPH-GDH)試劑盒說明書 (貨號:WS6040F 分光法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡介: 谷*酸脫氫酶廣泛分布于生物體中,在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作 用。其輔酶是 NADPH NADH,在動植物種兩種輔酶都有存在,在酵母中主要是 NADPH -谷*酸脫氫酶(EC 1.4.1.4)。 本試劑盒提供一種快速靈敏的檢測方法,樣品中的 NADPH-谷*酸脫氫酶特異性作用于 底物谷*酸并產(chǎn)生 NADPH,同時與顯色劑反應(yīng)生成黃色物質(zhì),該物質(zhì)在 450nm 處有吸 收峰,進而得到 NADPH-GDH 的酶活性大小。 二、試劑盒的組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體70mL×14℃保存 試劑一 液體10mL×14℃保存 濃度為1M 試劑二 液體5mL×14℃保存 試劑三 液體2.2mL×14℃保存 標準品 粉劑mg×14℃保存 若重新做標曲,則用到該試劑 注:粉劑量在 mg 級別,使用前用手甩幾次或者進行離心,打開直接加入要求的試劑即可。 三、所需的儀器和用品: 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、 研缽、冰和蒸餾水。 四、NADPH-谷*酸脫氫酶(NADPH-GDH)活性測定: 1、樣本制備: ① 組織樣本: 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液,進行冰浴勻漿。12000rpm 4℃離心 10min,取上 清,置冰上待測。(或按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提?。?② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液; 超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。(或按照細菌或細胞數(shù)量(104 個): 提取液體積(mL)為 500~10001 的比例進行提取) ③ 液體樣本:直接檢測。 2、上機檢測①可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 450nm,蒸餾水調(diào)零。 ② 在 1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)中依次加入: 試劑名稱(μL測定管 提取液 320 試劑一 200 試劑二 80 樣本 160 試劑三 40 混勻,立即 450nm 下讀取 A1 值,15min 后讀取 A2 值。ΔA=A 2-A1。本試劑盒僅供科研使用 2 【注】:若ΔA 值過小,可以延長反應(yīng)時間 T(如由 15min 增至 30min 1 小時), 或增加加樣體積 V1(如由 160μL 增至 320μL,則提取液相應(yīng)減少),則改 變后的 T V1 需要代入計算公式重新計算。 五、結(jié)果計算: 1、標準曲線的方程:y = 0.0304x + 0.008,x NADPH 摩爾質(zhì)量(nmol),y 是ΔA。 2、按樣本蛋白濃度計算: 單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。 NADPH-GDH(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.008)÷0.0304]÷(V1×Cpr) ÷T =13.71×(ΔA-0.008)÷Cpr 3、按樣本鮮重計算: 單位定義:每克組織每分鐘生成 1 nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。 NADPH-GDH(nmol/min/g 鮮重)=[(ΔA-0.008)÷0.0304]÷(W×V1÷V) ÷T =13.71×(ΔA-0.008)÷W 4、按細菌/細胞密度計算: 單位定義:每 1 萬個細菌/細胞每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。 NADPH-GDH(nmol/min/104 cell)=[(ΔA-0.008)÷0.0304]÷(500×V1÷V) ÷T =0.028×(ΔA-0.008) 5、液體中 NADPH-GDH 活力計算: 單位定義:每毫升液體每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。 NADPH-GDH(nmol/min/mL)=[(ΔA-0.008)÷0.0304]÷V1÷T=13.71×(ΔA-0.008) V---加入提取液體積,1 mL;V1---加入樣本體積,0.16mL; T---反應(yīng)時間,15min; W---樣本質(zhì)量,g500---細菌或細胞總數(shù),500 萬; Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。 附:標準曲線制作過程: 1 制備標準品母液(0.5nmol/μL):向標準品 EP 管里面加入 1.2ml 蒸餾水(母液需在 兩天內(nèi)用且-20℃保存)。 2 把母液稀釋成六個濃度梯度的標準品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5.nmol/μL。也可根據(jù)實 際樣本來調(diào)整標準品濃度。 3 依據(jù)測定管的加樣表操作,根據(jù)結(jié)果即可制作標準曲線。



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