| 上海宇淳生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥560-￥920 |
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型號(hào)
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 560元 | 1 盒 可售 |
| 96T | 920元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-05-31 10:52:03瀏覽次數(shù)：256
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土壤磷酸二酯酶(S-PDE)試劑盒,微板法
土壤磷酸二酯酶(S-PDE)試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 土壤磷酸二酯酶（S-PDE）活性測(cè)定試劑盒說明書 (貨號(hào):WS0430W 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡介： 土壤磷酸二酯酶（S-PDE，EC 3.1.4.1）是在土壤磷酸單酯酶之后的的第二大磷酸酶。 其在土壤有機(jī)磷的循環(huán)代謝中起到重要作用。 本試劑盒提供一種簡單、靈敏、快速的的檢測(cè)方法。土壤磷酸二酯酶（S-PDE）催化 雙(4-硝基苯)磷酸酯 （BNPP）生成黃色的產(chǎn)物 PNP，該產(chǎn)物在 405nm 處有吸收峰。 通過檢測(cè) PNP 在 405nm 下的增加速率，即可得到 S-PDE 酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 120mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×6 支 4℃保存 臨用前每支甩幾下或離心使粉劑落入 底部，每支再加 4mL 蒸餾水充分溶解， 現(xiàn)配先用，兩天內(nèi)用完。 試劑三 液體 80mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱、天平、可調(diào)式移液器。 四、土壤磷酸二酯酶（S-PDE）活性測(cè)定： 1、樣本制備： 取新鮮土樣或干土（風(fēng)干或者 37 度烘箱風(fēng)干），先粗研磨，過 40 目篩網(wǎng)備用。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 405 nm。 ② 在離心管中依次加入下列試劑： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 土樣 0.1g 鮮土或 0.05g 干土 0.1g 鮮土或 0.05g 干土 試劑一 500 500 試劑二 100 37℃（水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱）振蕩反應(yīng) 1 h 試劑三 400 400 試劑二 100 混勻，12000rpm 室溫離心 5min，立即取上清液 200μL 于 96 孔板中，立 即于 405nm 下讀取吸光值 A，△A= A 測(cè)定- A 對(duì)照（參考注意事項(xiàng)）。 【注】：1.若 A 測(cè)定超過 1.5，可對(duì)最后一步的待檢測(cè)上清液(測(cè)定管和對(duì)照管)同時(shí)進(jìn)行稀釋（用水稀釋即 可），稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式； 2.若ΔA 在零附近徘徊，可延長 37℃的孵育時(shí)間 T（如增至 4 小時(shí)或更長），或增加土樣質(zhì)量 W（如 增至 0.2g）。則改變后的 T 和 W 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 3.若同時(shí)檢測(cè)同一背景下的土壤樣本，此批土壤樣本可做做三次樣本自身對(duì)照管（取平均值作為 這批土壤樣本的對(duì)照管），節(jié)省時(shí)間；若是不同背景下的土壤樣本（如黑土，紅土，黃土等）， 則每個(gè)樣本需做一個(gè)自身對(duì)照，即按照說明書加樣表操作即可，本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0127x - 0.01；x 是 PNP 摩爾質(zhì)量（nmol）， y 是△A。 2、活性定義：在 37℃，每克土壤每小時(shí)水解 BNPP 產(chǎn)生 1nmol PNP 定義為 1 個(gè)酶活單位。 S-PDE(nmol/h/g 土樣)=[(△A+0.01)÷0.0127]÷W÷T×D=78.74×(△A+0.01)÷W×D W---土壤樣品質(zhì)量，g； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； T---催化反應(yīng)時(shí)間，1 h； PNP 相對(duì)分子質(zhì)量---139.11。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（10μmol/mL）：向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸餾水超聲溶解， 若有結(jié)晶析出，需 37℃水浴至*全溶解。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 2, 4, 6, 8, 10 μmol/mL。也可根據(jù)實(shí)際樣本 來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 在 EP 管中直接加入：10μL 標(biāo)準(zhǔn)品+590μL 試劑一+400μL 試劑三，混勻，立即取上 清液 200μL 于 96 孔板中，立即于 405nm 下讀取吸光值 A。 4 根據(jù)結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
