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土壤脂肪酶(S-LPS)試劑盒,微板法
土壤脂肪酶(S-LPS)試劑盒,微板法
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土壤脂肪酶(S-LPS)試劑盒,微板法
脂肪酶(EC 3.1.1.3)是一種特殊的酯鍵水解酶,能催化天然油脂水解,,在食品、醫(yī)藥、洗 滌劑和皮革等許多工業(yè)領(lǐng)域中都有廣泛的應(yīng)用

土壤脂肪酶(S-LPS)試劑盒,微板法

土壤脂肪酶(S-LPS)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤脂肪酶(S-LPS)活性試劑盒說明書 (貨號(hào):WS8330W 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介: 脂肪酶(EC 3.1.1.3)是一種特殊的酯鍵水解酶,能催化天然油脂水解,,在食品、醫(yī)藥、洗 滌劑和皮革等許多工業(yè)領(lǐng)域中都有廣泛的應(yīng)用。 本試劑盒提供一種簡(jiǎn)單、快速的檢測(cè)方法,以對(duì)硝基*酚酯作為底物,脂肪酶水解底物 產(chǎn)生具有顏色的對(duì)硝基*酚,在405nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光值,即可得出脂肪酶活力。 二、試劑盒的組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 A 液:μL×4 B 液:5mL×1 -20℃保存 臨用前甩幾下,使微量 A 液體落到底 部,再向每支 A 液中加入 1.2mLB 液, 混勻備用,用不完的試劑仍-20保存。 試劑二 液體 35mL×1 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,則用到該標(biāo)曲。 三、所需的儀器和用品: 酶標(biāo)儀、96 孔板、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、冰和蒸餾水。 四、土壤脂肪酶(S-LPS)活性測(cè)定: 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)! 1、樣本制備: 取新鮮土樣或風(fēng)干(可 37 度烘箱風(fēng)干)土樣,先粗研磨,過 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】:土壤風(fēng)干,減少土壤中水分對(duì)于實(shí)驗(yàn)的干擾;土壤過篩,保證取樣的均勻細(xì)膩; 2、上機(jī)檢測(cè)① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 405 nm。 ② 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(μL測(cè)定管 空白管(僅做一次) 土壤樣本(g0.1g 試劑一 40 40 試劑二 340 340 混勻,30℃條件振蕩反應(yīng) 20min,立即于 4℃,12000rpm 離心 10min,取出 200μL 上清液至 96 孔板中,于 405nm 處讀取吸光值 A,A=A 測(cè)定-A 空白。 【注】若ΔA 值在零附近,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間 T(如至 40min 或更長(zhǎng)),或增加土壤樣本量 W(如 增至 0.2g,則改變后的反應(yīng)時(shí)間 T 和土壤樣本質(zhì)量 W 需代入公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算: 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y = 0.022x - 0.0066x 是標(biāo)準(zhǔn)品摩爾質(zhì)量(nmol),y ΔA。本試劑盒僅供科研使用 2 2、酶活定義:每小時(shí)每克土樣釋放出 1nmol 對(duì)硝基*酚的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。 S-LPS(nmol/h/g 干土) =[(A+0.0066)÷0.022]÷W÷T=136.4×(A+0.0066) ÷W T---反應(yīng)時(shí)間,20 min=1/3h; W---土壤樣本實(shí)際取樣量,g。 附:標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程: 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液(20μmol/mL):向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 1ml 蒸餾水。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品:0, 0.8, 1.6, 2.4, 3.2, 4μmol/mL。也可根據(jù)實(shí)際 樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 96 孔板中加入:10μL 標(biāo)準(zhǔn)品+40μL B +330μL 試劑二,混勻,于 405nm 讀取吸光值,根據(jù)結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。



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