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肌酸(Creatine)含量試劑盒(肌酸酶法)微板法

肌酸(Creatine)含量試劑盒(肌酸酶法)微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 肌酸含量（酶法）檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書 （貨號(hào):WS3021W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 肌酸是一種內(nèi)源性化合物，其功能是通過(guò)肌酸激酶的磷酸化使機(jī)體維持高的ATP/ADP 比率。肌酸補(bǔ)充劑是一種運(yùn)動(dòng)性能增強(qiáng)劑，亦用于治療肌肉和神經(jīng)退行性等疾病。因此 肌酸的檢測(cè)在研究和開(kāi)發(fā)中具有廣泛的應(yīng)用。 本試劑盒利用肌酸酶特異作用于肌酸生成肌氨酸，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生 成過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫與顯色劑反應(yīng)呈現(xiàn)（粉）紅色，該有色物質(zhì)在520nm有吸收 峰，進(jìn)而計(jì)算得到肌酸含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 11mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 8mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 粉體 mg×1 支 -20℃保存 臨用前甩幾下使液體落入底部， 再加 1.1mL 的蒸餾水溶解備用。 試劑四 粉體 mg×1 支 -20℃保存 臨用前甩幾下使液體落入底部， 再加 1.1mL 的蒸餾水溶解備用。 標(biāo)準(zhǔn)管 液體 1mL×1 支 4℃保存 臨用前用蒸餾水稀釋2倍， 即0.5mg/mL肌酸溶液 三、所需儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、可調(diào)式移液器、離心機(jī)、蒸餾水。 四、肌酸含量檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、 樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織樣本，加 1mL 的提取液研磨，粗提液全部轉(zhuǎn)移到 EP 管中，12000rpm， 常溫離心 10min，上清液待測(cè)。 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣品：澄清的液體可直接檢測(cè)；若渾濁則離心后取上清液檢測(cè)。本試劑盒僅供科研使用 2 2、上機(jī)檢測(cè)： ①酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，設(shè)置溫度在 37℃，設(shè)定波長(zhǎng)到 520nm。 ②做實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本，找出適合本次檢測(cè)樣本的稀釋倍數(shù) D。 ③所有試劑解凍至室溫，在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 空白管 （僅做一次） 標(biāo)準(zhǔn)管 （僅做一次） 樣本 10 蒸餾水 10 標(biāo)準(zhǔn)品 10 試劑一 100 100 100 試劑二 70 70 70 試劑三 10 10 10 混勻，37℃避光孵育 10min， 試劑四 10 10 10 混勻，37℃避光反應(yīng) 30min，520nm 處讀取吸光值 A（直到 A 值不變）， △A=A 測(cè)定-A 空白。 【注】：1. 測(cè)定管的 A 值若超過(guò) 1，可用蒸餾水對(duì)樣本進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式。 2. 若△A 的值小于 0.005，可增加樣本加樣體積 V1（如由 10μL 增至 50μL，則試劑一相應(yīng) 減少），或增加樣本取樣質(zhì)量 W；則改變后的 V1 和 W 需代入公式重新計(jì)算。 3. 若樣本自身含有高的肌氨酸含量，需增設(shè)一個(gè)樣本自身對(duì)照： （即 10μL 樣本+110μL 試劑一+70μL 試劑二+10μL 試劑三），△A=A 測(cè)定-A 對(duì)照。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按照質(zhì)量計(jì)算： 肌酸含量(μmol/g)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(V1÷V×W)×D×103÷Mr =3.81×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D÷W 2、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： 肌酸含量(nmol/104 cell)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(V1÷V×500)×D×106÷Mr =7.63×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D 3、按照體積計(jì)算： 肌酸含量(μmol/L)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷V1×D×106÷Mr =3813×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D C 標(biāo)準(zhǔn)---標(biāo)品濃度，0.5mg/mL； Mr---標(biāo)準(zhǔn)品分子量，131.13； V---提取液體積，1mL； V1---加入樣本體積，0.01mL； 500---細(xì)胞數(shù)量，百萬(wàn)； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1。