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| 參考價 | ￥840 |
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型號
-
品牌
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經銷商 -
所在地
上海市
| 96T | 840元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-08-20 15:35:45瀏覽次數：304
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γ-氨基丁酸(GABA)含量試劑盒,微板法
γ-氨基丁酸(GABA)含量試劑盒,微板法
1 γ-氨基丁酸（GABA）含量試劑盒說明書 （貨號：WS6011W 微板法 96 樣） 一、產品簡介： 4-氨基丁酸（GABA）廣泛分布在動植物體中。在動物體內 GABA 幾乎只存在于神經 組織中。在植物中如豆屬、參屬、中草藥等的種子、根莖和組織液中都含有 G A B A， 且與植物的環(huán)境應激反應有關。 4-氨基丁酸（GABA）在堿性溶液中與次氯酸鹽和*酚反應生成藍綠色物質，通過檢 測該有色物質在 645nm 波長處的值，即可得出樣本中 GABA 的含量。 二、試劑盒的組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 4mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 2mL×1 支 4℃保存 臨用前取出0.13mL試劑二至一支 新 EP 管中，再向其中加入 1.87mL 蒸餾水混勻做為試劑二使用（該 液體一周內用完）。 試劑三 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、可調式移液槍、水浴鍋、離心機、研缽、蒸餾水。 四、γ-氨基丁酸（GABA）含量測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本：稱取約 0.1g 組織樣本加入研缽中，加入 1mL 提取液，在冰上進行勻漿， 12000rpm，4℃或室溫離心 10min，取上清液待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液(mL)為 1：5~10 的比例進行提取。 ② 細菌/細胞樣本：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細 胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s， 重復 30 次）；12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：澄清的液體樣本直接測定，若渾濁則離心后取上清檢測。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30 min，調節(jié)波長到 645 nm。 ② 所有試劑解凍至室溫（25℃）。則試劑一和二可按照 30:200 的比例預先配制成混合液 （用多少配多少，現(xiàn)配現(xiàn)用），在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 空白管（僅做一次） 樣本 50 蒸餾水 50 混合液 230 230 試劑三 100 100 混勻，沸水?。?/span>95-100℃）10min，冰浴至室溫，若渾濁需2 12000rpm 離心 5min，取澄清的 200μL 至 96 孔板中，于 645nm 處讀取各管的 A 值。△A=A 測定-A 空白。 【注】1.若測定管的 A 值大于 1，則需將樣本進行稀釋（用蒸餾水稀釋），稀釋倍數 D 需代入計 算公式重新計算。 2.若△A 值低于 0.01，則可增加樣本取樣量 W（如增至 0.2g）或增加樣本加樣量 V1（如 由 50μL 增至 100μL，則混合液和試劑三均各自減少 25μL），則 W 和 V1 代入計算公式重 新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 0.0576x - 0.0236，x 為標準品質量(μg)，y 為吸光值ΔA。 2、按樣本質量計算： GABA 含量(μg/g 重量)=[(ΔA+0.0236)÷0.0576]÷(W×V1÷V)×D =347.2×(ΔA+0.0236)÷W×D 3、按細胞數量計算： GABA 含量(μg/104 cell)=[(ΔA+0.0236)÷0.0576]÷(500×V1÷V)×D =0.7×(ΔA+0.0236)×D 4、液體中 GABA 含量計算： GABA 含量(μg/mL)=[(ΔA+0.0236)÷0.0576]÷V1×D=347.2×(ΔA+0.0236)×D V---提取液體積，1mL； V1---樣本加入體積，0.05mL； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； W---樣本取樣質量，g； 500---細胞數量，萬。 附：標準曲線制作過程： 1 標準品母液（5mg/mL）：標準品臨用前甩幾下使粉體落入底部，再加 2mL 蒸餾水溶解（兩天內用 完）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 mg/mL。也可根據實際樣本 來調整標準品濃度。 3 按照測定管的加樣體系操作，根據結果即可制作標準曲線。
