| 上海宇淳生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥1630 |
-
型號(hào)
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 96T | 1630元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-05-24 15:42:23瀏覽次數(shù)：223
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線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶活性試劑盒,微板法
線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶活性試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶（mt-GPD）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS7190W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶（mt-GPD）存在于線粒體中，在 3-磷酸甘油途徑中起重要 作用，催化底物 3-磷酸甘油生成磷酸二羥丙酮，同時(shí)生成的電子和氫進(jìn)入呼吸鏈參與氧 化磷酸化；在電子傳遞體（PMS）存在下，使噻唑藍(lán)（MTT）還原生成藍(lán)色產(chǎn)物，通過(guò) 檢測(cè)該藍(lán)色產(chǎn)物在 550nm 處的增加速率，即可得出 mt-GPD 活性大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 0.2mL×1 支 4℃保存 試劑四 粉劑 mg×2 支 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部， 每支加 0.6mL 的蒸餾水溶解。 一周內(nèi)用完。 試劑五 粉劑 mg×4 支 -20℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部， 每支加 0.3mL 的蒸餾水溶解。 一天內(nèi)用完。 試劑六 液體 17mL×1 瓶 4℃保存 試劑七 粉劑 mg×1 支 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部， 臨用前加 1.1mL 蒸餾水溶解。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、可調(diào)試移液器、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、研缽、冰和蒸餾水。 四、線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶（mtGPD）活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、線粒體制備（提示：整個(gè)線粒體的提取過(guò)程須保持 4℃低溫環(huán)境）： ① 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)菌/細(xì)胞，加入 1mL 試劑一，用冰浴勻漿器或研缽勻 漿，轉(zhuǎn)移至離心管后于 4℃×700g 離心 10min。 ② 棄沉淀，上清液移至另一離心管中，4℃×12000g 離心 10min。用移液器移除上清液(上 清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的酶活性（此步可選做）)，留下沉淀 （沉淀即為線粒體）。 ③ 在沉淀（線粒體）中加入200μL試劑二和2μL試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或 200W，超聲3s，間隔10秒，重復(fù)30次），液體置于冰上用于線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶 （mtGPD）活性測(cè)定。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取，或按照 細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 550nm。 ② 在 96 孔板中依次加入下列試劑：本試劑盒僅供科研使用 2 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 樣本 20 試劑四 10 試劑五 10 試劑六 150 試劑七 10 混勻后立即在 550nm 處讀取 A1 值，5min 后讀取 A2。 ΔA=A2-A1。 【注】：加完試劑四即啟動(dòng)反應(yīng)，所以試劑四加完需立即檢測(cè)，若ΔA 小于 0.05， 則增加樣本上樣量 V1，試劑三相應(yīng)減少保持原體系不變（如樣本上樣量為 40μL 時(shí)，試劑三為 130μL）。則改變后的 V1 需帶入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、 按樣本蛋白濃度計(jì)算 酶活定義：每毫克組織蛋白每分鐘還原 1 nmol 噻唑藍(lán)（MTT）定義為一個(gè)酶活性單位。 mtGPD 活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(V1×Cpr) ÷T=493.8×ΔA÷Cpr 2、 按樣本鮮重計(jì)算 酶活定義：每克組織每分鐘還原 1 nmol 噻唑藍(lán)（MTT）定義為一個(gè)酶活性單位。 mtGPD 活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(W×V1÷V)÷T=99.8×ΔA÷W 3、 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算 酶活定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘還原 1 nmol 噻唑藍(lán)（MTT）定義為一個(gè)酶活單位。 mtGPD 活性（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.2×ΔA ε---還原型 MTT 的摩爾消光系數(shù)，8.1×103 L/mol/cm； d---96 孔板光徑，0.5cm； V---加入提取液體積，0.202mL； V1---加入樣本體積，0.02 mL； V2---反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L； T---反應(yīng)時(shí)間，5min； W---樣本質(zhì)量，g； 500---細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒。
