| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥1440-￥2250 |
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型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 96T | 2250元 | 1 盒 可售 |
| 48T | 1440元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-05-27 10:25:15瀏覽次數(shù)：235
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土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)測試盒,微板法
土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)測試盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 土壤亮*酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S-LAP） 試劑盒說明書 （貨號:WS9230W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 土壤亮*酸氨基肽酶（LAP，EC 3.4.11.1）是一類能水解肽鏈 N-末端為亮*酸的酶， 由土壤微生物分泌。該酶活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。 土壤亮*酸氨基肽酶（S-LAP）分解 L-亮氨酰對硝基苯胺生成對硝基苯胺，該物質(zhì)在 405nm 有吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算 S-LAP 活性。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存條件 備注 試劑一 液體 120mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×2 支 -20℃保存 臨用前甩幾下，使試劑落入底 部，再加 2.7mL 乙醇混勻溶解。 試劑三 液體 70mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺式離心機(jī)、恒溫振蕩培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、天平。 四、土壤亮*酸氨基肽酶（S-LAP）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本處理： 取新鮮土樣或干土（風(fēng)干或者 37 度烘箱風(fēng)干），先粗研磨，過 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】土壤風(fēng)干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細(xì)膩； 2、上機(jī)檢測： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 405nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 空白管（僅做一次） 土樣（g） 0.05 0.05 試劑一 450 500 450 試劑二 50 50 充分混勻，37℃培養(yǎng) 1 小時（振蕩培養(yǎng)或間隔 20min 手動振蕩混勻 幾下） 試劑三 300 300 300 混勻，8000rpm 離心 5min（若上清液不澄清可加大離心力），取 200μL 上清液至 96 孔板中，405nm 下讀取吸光值 A，△A=A 測定- A 對照-A 空白（每個樣本做一個自身對照）。 【注】：1.若ΔA 較小，可延長 37℃的孵育時間 T（如增至 4 小時或更長），或增加土樣質(zhì) 量 W（如增至 0.2g）。則改變后的 T 和 W 需代入計算公式重新計算。 2.若測定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可縮短 37℃的孵育時間 T（如減至 0.5 小時或更短）。 則改變后 T 需代入計算公式重新計算?；?qū)ψ詈笠徊降拇龣z測上清液（包括測定管、對照管 和空白管）同時用蒸餾水進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計算公式。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 0.0078x - 0.0024；x 為標(biāo)準(zhǔn)品摩爾質(zhì)量（nmol），y 為△A。 2、單位定義：每小時每克土樣生成 1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。 S-LAP(nmol/h/g 土樣)=(ΔA+0.0024)÷0.0078÷W÷T×D=128.2×(ΔA+0.0024)÷W×D T---反應(yīng)時間，1h； W---土壤樣本實際取樣量，g。 D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（10μmol/mL）：臨用前甩幾下或離心，使粉體落入底部，加入 0.5mL 乙醇，渦旋震蕩溶解后再加入 0.5mL 的蒸餾水混勻，得到 10μmol/mL 備用。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度：0,0.4,0.8,1.2,1.6, 2μmol/mL。也可根據(jù)實際樣本來 調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 在 EP 管依次加入：50μL 標(biāo)準(zhǔn)品+450μL 試劑一+300μL 試劑三，混勻，取 200μL 至 96 孔板中，于 405nm 下讀取吸光值，根據(jù)結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
