| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥1190 |
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型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 1190元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-05-22 16:27:04瀏覽次數(shù)：236
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蔗糖合成酶SS-Ⅱ(合成方向)試劑盒,微板法
蔗糖合成酶SS-Ⅱ(合成方向)試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 蔗糖合成酶（合成方向；SS-Ⅱ）試劑盒說明書 （貨號：WS2150W 微板法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 蔗糖是重要的光合產(chǎn)物，是植物體內運輸?shù)闹饕镔|，優(yōu)勢碳水化合物的暫貯形式之一。 蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，EC 2.4.1.13）是雙向反應酶，既可催化蔗糖合成又可催化 蔗糖分解，是蔗糖代謝的關鍵酶之一。研究其合成方向 SS-Ⅱ的活性對于植物蔗糖合成具 有重要意義。 SS-Ⅱ催化游離果糖與葡萄糖供體 UDPG 反應生成蔗糖，采用蔗糖與間苯*fen反應生成 的有顏色產(chǎn)物在 480nm 下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色深淺成正比。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60ml×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 2.1ml×1 支 -20℃保存 試劑二 液體 1ml×1 支 4℃保存 試劑三 液體 20ml×1 瓶 4℃保存 試劑四 粉劑 mg×2 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉劑落入底部，每 瓶加入 4mL 蒸餾水充分溶解，現(xiàn)配 現(xiàn)用，一周內用完。 標準品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、低溫離心機、水浴鍋、移液器、蒸餾水。 四、蔗糖合成酶（SS-Ⅱ）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。 12,000rpm 4℃離心 10min，取上清作為待測樣品。 【注意】 若樣本含糖量高，可引起 A 對照值較大如超過 1.6，即檢測背景值過高會影響檢測，可在樣本 制備過程中增加除糖步驟：取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.5g），加入 1mL 經(jīng)預冷的 95%乙醇 冰浴勻漿，4℃放置 10min；12000rpm，4℃離心 5min；棄上清，留沉淀，向沉淀中加入經(jīng)預冷的 80% 乙醇混勻，4℃放置 5min；12000rpm，4℃離心 5min；棄上清，留沉淀。再向沉淀中加入 1mL 經(jīng)預冷 提取液渦旋混勻，4℃放置 10min；12000rpm，4℃離心 10min；留上清，棄沉淀。上清液置冰上待測。 ② 液體樣本：直接測定。若渾濁，離心后取上清檢測。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 480nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 試劑一 40 蒸餾水 40 樣本 20 20 37℃水浴 20min 試劑二 10 10本試劑盒僅供科研使用 2 試劑二需直接加到反應液里面，且務必混勻（可用槍頭吸 打），95℃水浴煮沸 10min（可用封口膜纏緊，防止水分散 失），冷卻至室溫。 試劑三 200 200 試劑四 60 60 混勻，95℃水浴 20min，冷卻后，取 200μL 至 96 孔板中， 480nm 下測定。ΔA=A 測定管-A 對照管（每個測定管需設 一個對照管）。 【注】：若ΔA 值過小如在零附近徘徊，可延長 37℃水浴時間 T（如 40min 或更長）或增加樣本取樣 量 W（如增至 0.2g），或者增加樣本加樣體積 V1（如 40μL，則試劑三相應減少），相應的變 量重新代入計算公式計算。 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 0.0053x - 0.0044；x 為蔗糖標準品質量（μg），y 為ΔA。 2、按照蛋白濃度計算： 單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。 SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)=[(ΔA+0.0044)÷0.0053]÷(V1×Cpr) ÷T =471.7×(ΔA+0.0044) ÷Cpr 3、按照樣本鮮重計算： 單位定義：每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。 SS-Ⅱ活性(μg/min/g 鮮重)=[(ΔA+0.0044)÷0.0053]÷(W×V1÷V) ÷T =471.7×(ΔA+0.0044)÷W 4、按照液體體積計算： 單位定義：每毫升液體每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。 SS-Ⅱ活性(μg/min/mL)=[(ΔA+0.0044)÷0.0053]÷V1÷T=471.7×(ΔA+0.0044) V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.02 mL； T---反應時間，20 min； W---樣本質量，g； Cpr---樣本蛋白質濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒； 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（10mg/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1mL 蒸餾水（母液需在兩天 內用且-20℃保存）。 2 把母液稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 2, 4, 6, 8, 10. mg/mL。也可根據(jù)實際樣本來 調整標準品濃度。 3 按照：20μL 標準品+40μL 蒸餾水+10μL 試劑二+200μL 試劑三+60μL 試劑四，依次 加樣操作，95℃水浴 20min，冷卻后，取 200μL 至 96 孔板中，480nm 下測定，根 據(jù)結果即可制作標準曲線。
