| 上海宇淳生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥1530 |
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型號(hào)
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷(xiāo)商 -
所在地
上海市
| 48T | 1530元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-05-22 11:16:17瀏覽次數(shù)：195
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淀粉去分支酶(DBE)試劑盒,微板法
淀粉去分支酶(DBE)試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 淀粉脫分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS0450W 微板法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 淀粉去分支酶(DBE)（EC 3.2.1.68）屬于淀粉水解酶家族，特異性地水解支鏈淀粉的 α-1，6 糖苷鍵，產(chǎn)生線性的葡萄糖鏈，在調(diào)整支鏈淀粉分子的鏈長(zhǎng)方面有重要的作用。 采用 3，5-二硝基水楊酸法測(cè)定 DBE 催化支鏈淀粉產(chǎn)生的還原糖，通過(guò)測(cè)定還原糖 含量的變化來(lái)得到 DBE 酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制 試劑名稱(chēng) 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下，使試劑落入底部，再加 24mL 試劑一，于 80℃水浴鍋中溶解呈透 明狀態(tài)，待冷卻后使用。 試劑三 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 12mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、可調(diào)式移液器、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、研缽、冰、蒸餾水 四、淀粉脫分支酶（DBE）活性檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進(jìn)行冰浴勻漿。12000rpm，4℃離心 10min，取 上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取 2、上機(jī)檢測(cè)： 1 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 540 nm。 2 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 樣本 20 20 （95℃煮沸 10min 的酶液） 試劑二 200 200 37℃孵育 30min 試劑三 280 280 試劑四 100 100 混勻，95℃顯色 10min 后，流水冷卻至室溫后，取出 200μL 至 96 孔板中，于 540nm 處讀取吸光值 A，ΔA＝A 測(cè)定-A 對(duì)照。 【注】若ΔA 差值較小，可加大樣本量，或延長(zhǎng)孵育時(shí)間至 1 小時(shí)或更長(zhǎng)。本試劑盒僅供科研使用 2 則改變后的加樣量 V1 或反應(yīng)時(shí)間 T 需重新代入公式計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 2.5359x - 0.0196，x 是標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量（mg），y 是ΔA。 2、按照蛋白濃度計(jì)算 酶活定義：每毫克組織蛋白每小時(shí)水解支鏈淀粉產(chǎn)生 1mg 還原糖（以麥芽糖計(jì)）定義為 一個(gè)酶活力單位。 DBE 活力(mg/h/mg prot)=[ (ΔA+0.0196)÷2.5359]÷(V1×Cpr)÷T =39.43× (ΔA+0.0196) ÷Cpr 3、按樣本鮮重計(jì)算 酶活定義：每克組織每小時(shí)水解支鏈淀粉產(chǎn)生 1mg 還原糖（以麥芽糖計(jì)）定義為一個(gè)酶 活力單位。 DBE 活力(mg /h/g 鮮重)=[ (ΔA+0.0196)÷2.5359]÷(W×V1÷V)÷T =39.43× (ΔA+0.0196) ÷W V----加入提取液體積，1 mL； V1----反應(yīng)中樣品體積，20μL=0.02mL； W----樣品質(zhì)量，g； T----反應(yīng)時(shí)間，30min=0.5h； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒； 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（50mg/mL）：臨用前加 1mL 蒸餾水，充分溶解混勻。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0,5,10,15,20, 25mg/mL。也可根據(jù)實(shí)際樣本來(lái) 調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 按照測(cè)定管加樣體系操作，依據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
