| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥1840 |
-
型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 1840元 | 99 盒 可售 |
更新時間：2024-05-17 16:01:52瀏覽次數(shù)：255
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海藻糖-6-磷酸合酶(TPS)試劑盒,微板法
海藻糖-6-磷酸合酶(TPS)試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用
海藻糖-6 磷酸合成酶（TPS）試劑盒說明書
（貨號：WS6550W 微板法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 海藻糖-6磷酸合成酶（TPS，EC 2.4.1.15）是海藻糖合成的關(guān)鍵酶之一，催化UDP- 葡萄糖和葡萄糖-6磷酸生成海藻糖-6磷酸和UDP。UDP與磷酸烯醇式丙酮酸在丙酮酸激 酶和乳酸脫氫酶的逐一作用下，使NADH氧化為NAD+，通過檢測NADH在340nm處的 下降量來計(jì)算TPS的酶活力大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×1 支 4℃保存 用前甩幾下或離心使粉劑落入底部，再 加 0.6mL 蒸餾水溶解備用。 試劑二 液體 19mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 粉劑 mg×1 支 4℃保存 用前甩幾下或離心使粉劑落入底部，再 加 1.5mL 蒸餾水溶解備用。 試劑四 粉劑 mg×4 支 -20℃保存 用前甩幾下或離心使粉劑落入底部，分 別加 0.3mL 蒸餾水溶解備用。用不完的 試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融， 三天內(nèi)用完。 試劑五 粉劑 mg×1 支 -20℃保存 用前甩幾下或離心使粉劑落入底部，再 加 1.1mL 蒸餾水溶解備用。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱/金屬浴、可調(diào)式移液器、研缽、冰。 四、海藻糖-6磷酸合成酶（TPS）活性測定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí) 驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織樣本，加入 1mL 提取液，冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取。 ② 細(xì)菌/真菌樣本： 先收集細(xì)菌或真菌到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取 500 萬細(xì)菌或真菌加入 1mL 提取 液；冰浴超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次），室溫晃動提取 30min， 8000rpm 室溫（25℃）離心 10min，取上清。 【注】：若增加樣本量，可按照提取液體積(mL) ：細(xì)菌或真菌數(shù)量（104個）為 1：500~1000 的比例提取 2、上機(jī)檢測： 1 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm。 2 所有試劑解凍至室溫（25℃）。 3 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本 20 20 試劑一 10本試劑盒僅供科研使用 2 試劑二 70 80 混勻，35℃孵育 30min 后，立即于 95-100℃煮沸 5min， 10000rpm，4℃離心 5min，上清液待測。 4 在 96 孔板中依次加入： 試劑二 110 110 試劑三 10 10 試劑四 10 10 試劑五 10 10 ③的上清液 60 60 混勻，35℃下立即于 340nm 處讀取各管吸光值 A1， 30min 后讀取 A2?！?/span>A=(A1-A2)測定-(A1-A2)對照。 【注】 1.若△A 的值在零附近，可以適當(dāng)延長③歩的反應(yīng)時間到 60min 后或更長，改變后的反 應(yīng)時間需代入計(jì)算公式重新計(jì)算?；蜻m當(dāng)加大樣本量（如 40μL，則試劑二相應(yīng)減少）， 則改變后的加樣體積 V1 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 2. 若起始值 A1 太大如超過 2（如顏色較深的樣本）或ΔA 的值大于 0.4，可以適當(dāng)減少 ③的上清液加樣量 V3（如減少至 40μL，則試劑二相應(yīng)增加），則改變后的加樣體積 V2 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按樣本蛋白濃度計(jì)算 單位定義：每毫克組織蛋白在每分鐘內(nèi)氧化 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 TPS 活力（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V4÷（ε×d）×109] ×(V2÷V3) ÷(V1×Cpr) ÷T =178.6×ΔA÷Cpr 2、按樣本鮮重計(jì)算 單位定義：每克組織在每分鐘內(nèi)氧化 1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 TPS 活力（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V4÷（ε×d）×109] ×(V2÷V3)÷(W×V1÷V) ÷T =178.6×ΔA÷W 3、按細(xì)菌或真菌數(shù)量計(jì)算： TPS 活力(μg/104cell)= [ΔA×V4÷（ε×d）×109]×(V2÷V3)÷(500×V1÷V) ÷T =0.357×ΔA V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.02mL； V2---第③歩的反應(yīng)總體積，0.1mL； V3---第④歩中所取上清液體積，0.06mL； V4---反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L； d---96 孔板光徑，0.5cm； ε---NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm； W---樣本質(zhì)量，g； 500---細(xì)菌或真菌總數(shù)，500 萬； T---反應(yīng)時間，30min； Cpr---蛋白濃度（mg/mL），建議使用本公司的 BCA 蛋白含量測定試劑盒。
