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上海博湖生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測(cè)試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測(cè)試劑盒 |
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進(jìn)口ELISA試劑盒步驟與方法
2020-9-2 閱讀(1473)
進(jìn)口ELISA試劑盒使用方法：
1、組織固定于10%的福爾馬林中，常規(guī)脫水包埋。
2、切片厚4μm，常規(guī)脫蠟至水。
3、用配制好的Weigert氧化劑氧化5min。
4、稍水洗。
5、用Weigert漂白劑漂白1~2min。
6、流水沖洗2min。
7、95%的乙醇稍洗。
8、切片入裝有Weigert品紅染色液的染色缸(加蓋)中，室溫下染色1～3h。
9、用酸性分化液分化至無染液脫下，約2～3s。
10、流水沖洗10min。
11、VG染色液復(fù)染30s。
12、急速用水洗一下，立刻用95%的乙醇快速分化和脫水。
13、常規(guī)脫水透明，中性樹膠封固。
進(jìn)口ELISA試劑盒操作步驟：
1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后進(jìn)口ELISA試劑盒在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為300ng/L，200ng/L，100ng/L，50ng/L，25ng/L）。
2、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。
3、加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
4、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
5、配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
6、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿進(jìn)口ELISA試劑盒洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
7、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
8、溫育：操作同3。
9、洗滌：操作同5。
10、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
11、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
12、測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
