即用型藍白T載體E型（無啟動子，無MCS）

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更新時間：2018-06-13 16:19:08瀏覽次數(shù)：351次

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上海聯(lián)邁生物工程有限公司

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產(chǎn)品簡介

即用型藍白T載體E型（無啟動子，無MCS）本產(chǎn)品是用XcmI酶切線性化的DNA片段，其兩個末端的5'都有一個突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐熱酶（如Taq DNA聚合酶）擴增得到的PCR片段。
1. 由于是通過酶切制備，所以載體兩端的帶T率為100%，遠高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端轉移酶在平末端載體加尾得到的T載體。

詳細介紹

即用型藍白T載體E型（無啟動子，無MCS）

名稱	規(guī)格	價格	手冊
即用型藍白T載體E型（無啟動子，無MCS）	20次	詢價

本產(chǎn)品是用XcmI酶切線性化的DNA片段，其兩個末端的5'都有一個突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐熱酶（如Taq DNA聚合酶）擴增得到的PCR片段。

1. 由于是通過酶切制備，所以載體兩端的帶T率為100%，遠高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端轉移酶在平末端載體加尾得到的T載體。

2. 克隆的陽性率一般在90%以上，縮短了篩選過程。

3. 來源于pUC19 ，無RNA聚合酶啟動子，插入位點兩側無多克隆位點。

4. 可以使用pUC/M13 Forward和Reverse測序引物測定插入片段的序列。

5. T克隆位點位于β-半乳糖苷酶的α 肽編碼區(qū)內，可以進行藍白斑篩選。

6. 含有絲狀噬菌體f1 復制起始子，可以制備單鏈DNA。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經(jīng)反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節(jié)其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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