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上海邦景實業(yè)有限公司
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冷凍細胞活化操作步驟
2024-9-18 閱讀(70)
冷凍細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害，導致細胞之死亡。細胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復正常(例如產生單株抗體或是其它蛋白質)。收到細胞株包裹時，請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養(yǎng)， 或立即冷凍保存(置于–70 °C，隔夜后，移到liq N2)。
準備材料：37℃恒溫水槽、新鮮培養(yǎng)基、無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶、液氮或干冰容器。
操作步驟：
(1)操作人員應戴防護面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。
(2)自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時蓋子易松掉。
(3)將新鮮培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。
(4)取出冷凍管，立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，以70%酒精擦拭保存管外部，移入無菌操作臺內。
(5)取出解凍之細胞懸浮液，緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(稀釋比例為1:10～1:15)，混合均勻，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。取0.1ml解凍細胞懸浮液作存活測試。
(6)解凍后是否立即去除冷凍保護劑(例如DMSO或glycerol)，依細胞種類而異，一般而言，大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除，則將解凍之細胞懸浮液加入含有5-10ml培養(yǎng)基之離心管內，離心1000rpm，5分鐘，移去上清液，加入新鮮培養(yǎng)基，混合均勻，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
(7)若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。
