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上海萬疆生物技術(shù)有限公司

萬疆生物誘變物質(zhì)的微核測(cè)試

時(shí)間:2014-8-30閱讀:212
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一、實(shí)驗(yàn)原理
微核(micronuclei)簡稱(MCN)是真核類生物細(xì)胞中的一種異常結(jié)構(gòu),往往是細(xì)胞經(jīng)輻射或化學(xué)藥物的作用而產(chǎn)生的。在細(xì)胞間期,微核呈圓形或橢圓形,游離于主核之外、大小應(yīng)在主核1/3以下。微核的折光率及細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣,也具合成DNA的能力。一般認(rèn)為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的斷片產(chǎn)生的。我們科研工作證實(shí),整條的染色體或好幾條也能形成微核。這些斷片或染色體在細(xì)胞分裂末期被兩個(gè)子細(xì)胞核所排斥便形成了第三個(gè)核塊。已經(jīng)證實(shí)微核率的大小是和用藥的劑量或輻射累積效應(yīng)呈正相關(guān),這一點(diǎn)和染色體畸變的情況一樣。所以許多人認(rèn)為可用簡易的間期微核計(jì)數(shù)來代替繁雜的中期畸變?nèi)旧w計(jì)數(shù)。由于大量新的化合物的合成,原子能應(yīng)用,各種各樣工業(yè)廢物的排出,使人們很需要有一套高度靈敏,技術(shù)簡單的測(cè)試系統(tǒng)來監(jiān)視環(huán)境的變化。只有真核類的測(cè)試系統(tǒng)更能直接推測(cè)誘變物質(zhì)對(duì)人類或其它高等生物的遺傳危害,在這方面,微核測(cè)試是一種比較理想的方法。目前國內(nèi)外不少部門已把“微核測(cè)試用于輻射損傷、輻射防護(hù)、化學(xué)誘變劑、新藥試驗(yàn)、染色體遺傳疾病及癌癥前期診斷等各方面。
現(xiàn)有的微核測(cè)試系統(tǒng)多數(shù)是用哺乳動(dòng)物的骨髓細(xì)胞或外周血細(xì)胞。缺點(diǎn)是需要一定培養(yǎng)條件與時(shí)間、細(xì)胞同步化困難、微核率低,一般只在0.2%左右。近年來,有人采用高等植物花粉孢子利用它們天然的同步性作微核測(cè)試材料,取得良好的效果。其中馬德修用一種原產(chǎn)于美洲的鴨跖草(Tradescantiapaludosa)(一種葉子狹長形的鴨跖草,目前我國許多地方已經(jīng)引種),建立四分孢子期微核率計(jì)數(shù)(MCN-in-Tetrad)的測(cè)試系統(tǒng),是近年來報(bào)導(dǎo)的較好系統(tǒng)之一。該系統(tǒng)用低劑量的化學(xué)藥物處理或輻射處理,其微核率可達(dá)10%—67%。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br />1.是了解微核測(cè)定的方法與意義。
2.為尋找新的測(cè)試系統(tǒng)或測(cè)定更多的環(huán)境因素。
三、實(shí)驗(yàn)材料
具有幼嫩花序的鴨跖草(長在溫室中的鴨跖草都能現(xiàn)蕾開花,大田栽培花期也很長),剪取花序,每種處理重復(fù)3根。
四、實(shí)驗(yàn)器具和藥品
1.培養(yǎng)液:Knop氏培養(yǎng)液:1000ml蒸餾水+磷酸二氫鉀0.25g+*0.25g+硝酸鈣1.00g+硝酸鉀0.25g+微量磷酸鐵。
2.處理液:EMS(甲基磺酸乙酯),由培養(yǎng)液配成,50mmol/L,75mmol/L,100mmol/L,150mmol/L等各種處理濃度。NaN3(疊氮鈉),由培養(yǎng)液配成,0.2mmol/L0.4mmol/L,0.8mmol/L等各種濃度。
DES(硫酸二乙酯)由培養(yǎng)液配成50mmol/L,100mmol/L,150mmol/L等各種濃度。
3.固定液:3甲醇:1冰醋酸
染色:改良?jí)A性品紅液(配法參看實(shí)驗(yàn)二十八)
實(shí)驗(yàn)用具:30ml三角燒瓶,剪刀,鑷子,載玻片,蓋玻片等。

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