李記生物研發(fā)的Fast pfu酶較普通Pfu酶有更高的靈敏度和抗*力，在獲得理想擴(kuò)增效果的前提下，答復(fù)縮短了擴(kuò)增時(shí)間，非常適合1-20kb的長(zhǎng)片段擴(kuò)增。Lj 2 x fast pfu Master Mix是將PCR反應(yīng)所需的Fast pfu Taq酶、dNTPs 、MgCL2以及反應(yīng)提沖液預(yù)先配制成2倍濃度的混合物。本試劑專為擴(kuò)增克隆DNA片段優(yōu)化，高保真，錯(cuò)誤率僅為1x 10-6。

詳細(xì)介紹

Lj 2 x fast pfu Master Mix

訂購信息

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	保存	價(jià)格(元)
Lj 2 x fast pfu Master Mix	D1010L1185	1ml	-20℃	150

李記生物研發(fā)的Fast pfu酶較普通Pfu酶有更高的靈敏度和抗*力，在獲得理想擴(kuò)增效果的前提下，答復(fù)縮短了擴(kuò)增時(shí)間，非常適合1-20kb的長(zhǎng)片段擴(kuò)增。本制品是將PCR反應(yīng)所需的Fast pfu Taq酶、dNTPs 、MgCL2以及反應(yīng)提沖液預(yù)先配制成2倍濃度的混合物。2 xFast Pfu Master Mix 專為擴(kuò)增克隆DNA片段優(yōu)化，高保真，錯(cuò)誤率僅為1x 10-6，較普通Taq酶低100倍，較普通pfu酶低10倍。使用時(shí)只需加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，大大地簡(jiǎn)化了操作過程，減少了PCR操作過程中的污染。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸，收到貨后-20℃避光干燥保存，避免反復(fù)凍融，保存條件下1年有效。

使用方法

常用反應(yīng)體系

常用PCR程序

2 x Lj fast pfu Master Mix上游引物

下游引物

模板

ddH2O

25 μL

0.2-1.0μM(終濃度)

1-50ng（質(zhì)粒）

10ng-1μg（基因組）

至50μL

擴(kuò)增片段<3k

擴(kuò)增片段≥3k

94℃ 90sec

94℃ 20s

30次循環(huán) 57-60℃ 20s

72℃ 1kb/30s

72℃ 5min

4℃ 保溫

94℃

30次循環(huán)

72℃

4℃

5min

94℃ 5s

68℃1kb/30s

5min

保溫

使用建議

Fast pfu DNA 聚合酶產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平滑末端，無3’端“A”突出。PCR產(chǎn)物克隆方案有：

1） PCR前引物進(jìn)行5’端加磷修飾或?qū)CR產(chǎn)物磷酸化處理后再直接克隆于平滑末端的載體中。

2）將產(chǎn)物3’末端加A后再與T載體鏈接。

3）由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對(duì)活性可引起引物從3’端被部分降解。因此在設(shè)計(jì)引物時(shí)應(yīng)適當(dāng)增加引物的長(zhǎng)度，理想的引物長(zhǎng)度為20-30mers。另外為了減少有3’-5’外切酶活性引起的引物降解，盡量在冰上配制反應(yīng)體系。

注意事項(xiàng)

1. 需溶解*后使用，防止離子濃度不均勻。

2. 對(duì)高GC含量模板，建議將變性溫度提高到98℃。

3. 對(duì)于高GC模板，建議添加終濃度為5%-8%DMSO。

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	保存	價(jià)格（元）
	D1010L1186	5x1ml	-20℃	550
Lj 2 x Blood Taq Master Mix	D1010L1187	1 mL	-20 ℃	525
Lj 2 x Blood Taq Master Mix	D1010L1188	5 x 1 mL	-20 ℃	2200