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原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機(jī)體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

人氣管上皮細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡介：

人氣管上皮分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。體外培養(yǎng)的原代氣管上皮細(xì)胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上存在很大的相似性，因此，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人氣管上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人氣管上皮采用-混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機(jī)"，這時有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

小鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human leukocyte aigen A (HLA-A) ELISA Kit 人類白細(xì)胞抗原A(HLA-A)ELISA試劑盒

HumanBeta-naphtholELISAKit 人β萘酚(β-naphthol)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor乙型肝炎二對半全套(立可讀)規(guī)格：48T/96T

熒光原位雜交彗星檢測試劑盒20次

MouseIerleukin13,IL-13ELISAKit小鼠白介素13(IL-13)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠乙型肝炎表面抗體(HBsAb)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠乙型肝炎e抗體(HBeAb)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠乙酰轉(zhuǎn)移酶（CHAT）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒 ，英文名： CALU ELISA Kit

Porcine dexamethasone (Dex) ELISA Kit 豬(Dex)ELISA試劑盒

轉(zhuǎn)基因植物Bar基因核酸檢測試劑盒 48T

CLIAKitforMCP-1/CCL2/MCAFELISAKIT大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1規(guī)格：48T/96T

體液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitMHC/ELA馬主要組織相容性復(fù)合體規(guī)格：48T/96T

PDGFC重組食蟹猴 PDGF-C / PDGFC 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

HSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta 0.5mgHSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta) 熱休克蛋白-90β (抗原)

CA4重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CD3D Protein Human 重組人 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc & FLAG 標(biāo)簽)

SEMA3A Protein Mouse 重組小鼠 Semaphorin 3A / SEMA3A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

人氣管上皮細(xì)胞HSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta 0.5mgHSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta) 熱休克蛋白-90β (抗原)

CD3D Protein Human 重組人 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc & FLAG 標(biāo)簽)

PDGFC重組食蟹猴 PDGF-C / PDGFC 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

SEMA3A Protein Mouse 重組小鼠 Semaphorin 3A / SEMA3A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CA4重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。