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原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠腸動脈平滑肌細胞

商品屬性：

細胞簡介：

大鼠腸動脈平滑肌分離自腸系膜動脈組織；腸道指的是從胃幽門至的消化管。腸是消化管中最長的一段，也是功能最重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進行的，大腸主要濃縮食物殘渣，形成糞便，再通過直腸經(jīng)排出體外。腸道堪稱身體最勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內(nèi)的微生態(tài)系統(tǒng)。腸系膜動脈由背大動脈發(fā)出的走行在腸系膜內(nèi)，分布于消化管的動脈。分成腸系膜上動脈和腸系膜下動脈。前者主要分布于小腸左側(cè)，后者分布于結(jié)腸、大腸、泄殖腔等處。腸動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠腸動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的大鼠腸動脈平滑肌采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA 試劑盒 96T/48T

People of ansfusion ansmitted virus / symplectic type hepatitis virus ((TTV) ELISA Kit 人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒((TTV)ELISA試劑盒

HumanplateletaibodiesIgG/M/A,PA-IgG/M/AELISAKit 人抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-Thyroid-Peroxidaseaibody,TPO-AbELISA試劑盒人抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物氧化型(GSSG)濃度比色法定量檢測試劑盒50次

Humanansforminggrowthfactorsβ2，TGFβ2ELISAKit人轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

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小鼠Ⅲ型前膠原基端肽(PⅢ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠Ⅲ型膠原(ColⅢ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠酸性0酸酶1(ACP1)ELISA試劑盒 ，英文名： ACP1 ELISA Kit

Mouse glycogen phosphorylase MM (GP-MM) ELISA Kit 小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒

Ratbradykinin,BKELISAKit 大鼠血管舒緩激肽(BK)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

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細胞ROCK-II激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitColⅣ大鼠Ⅳ型膠原規(guī)格：48T/96T

LILRA5重組大鼠 LILRA5 蛋白 (His 標簽) Protein

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CD44重組人 CD44 蛋白 (His 標簽) Protein

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His 標簽)

FOLR1 Protein Mouse 重組小鼠 FOLR1 / FR-alpha 蛋白 (His 標簽)

大鼠腸動脈平滑肌細胞GABAB1(GABAb Receptor 1 0.5mgGABAB1(GABAb Receptor 1) g-氨基B1受體(多肽)

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His 標簽)

LILRA5重組大鼠 LILRA5 蛋白 (His 標簽) Protein

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