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公司是*的ATCC細胞供應(yīng)商，提供人皮膚成纖維細胞；HSAS4
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細胞名稱  人皮膚成纖維細胞；HSAS4  
形態(tài)特性   成纖維細胞樣　  
生長特性  貼壁生長  
特征特性   該細胞系來源于一男性的皮膚組織。2005年由昆明細胞庫建立。   
培養(yǎng)條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15%NBS  
傳代方法   1：2傳代；3-4天一次  
傳代情況  P2  
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　  
支原體檢測  熒光法（-）　  
STR   Amelogenin：XY；D8S1179：11,13；D21S11：29,31；D7S820：10,11；CSF1PO：10,13；D3S1358：16；TH01： 9；D13S317：8，11；D16S539： 12；D2S1338：20,21；D19S433：13；vWA：14,18；THOX：8, 11；D18S51：15,17；D5S818：11, 12；FGA：21,24。  
同工酶    
染色體    

使用權(quán)限  A類培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環(huán)境：首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細胞處于無菌、無毒的環(huán)境，即對培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過程中的污染。

2、營養(yǎng)物質(zhì)：細胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。

3、溫度和pH：細胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動物的體溫相近。多數(shù)細胞生存的適宜pH為7.2～7.4。

4、氣體環(huán)境：培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進行細胞培養(yǎng)時，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
重塑基質(zhì)的表型，同時，它們會分泌大量的透明質(zhì)酸來應(yīng)對修復(fù)時的炎癥反應(yīng)。  
細胞特性  
1)組織來源于實驗動物的正常皮膚組織。  
2)細胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（imentin）免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。  
5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。  
角質(zhì)形成細胞  
細胞詳述  
角質(zhì)形成細胞是一種不斷分化的復(fù)層鱗狀上皮細胞，其分化的zui終階是形成角蛋白。根據(jù)角質(zhì)形成細胞的發(fā)展階段和特點，從內(nèi)向外可將其分為五層。基底細胞層又稱生發(fā)層，棘細胞層，顆粒層，透明層，角質(zhì)層。  
角質(zhì)形成細胞的分化成熟表現(xiàn)為從基底層到向角質(zhì)層的逐漸移行。在單一移行過程中，角質(zhì)形成;細胞的形狀和功能也逐漸發(fā)生著變化，從單層柱狀上皮的基底層到扁平的細胞核消失的角質(zhì)層。新生的基底細胞進入棘細胞層，然后上移到顆粒層的zui上層。  
化過程的有效的模型。  
細胞特性  
1)細胞來源于實驗動物正常肌肉組織。  
2)細胞鑒定：肌動蛋白（α-actin）免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。  
5)細胞生長方式：長梭狀細胞，貼壁培養(yǎng)。  
骨骼肌成纖維細胞  
細胞詳述  
肌肉可分為肌腹和肌腱，其中兩端較細呈乳白色的部分為肌腱，呈索條或扁帶狀，由平行的膠原纖維束構(gòu)成，色白，有光澤，但無收縮能力，腱附著于骨處與骨膜牢固地編織在一起，屬于結(jié)締組織，同時，肌腹的表面包以結(jié)締組織性外膜，向兩端則與肌腱組織融合在一起，這些結(jié)締組織是由成纖維細胞構(gòu)成，具有支持、連接、保護和營養(yǎng)功能。  
細胞特性  
1)組織來源于實驗動物的正常腿部肌肉組織。  
2)細胞鑒定：波形蛋白（imentin）免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。  
5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。  
纖維環(huán)細胞  
細胞詳述  
纖維環(huán)，位于椎間盤的周緣部，由纖維軟骨組成，纖維環(huán)的纖維在椎體間斜行，在橫切面上排列成同心環(huán)狀，相鄰環(huán)的纖維具有相反的斜度，而相互交叉。纖維環(huán)細胞位于膠原纖維束之前，合成和分泌纖維環(huán)細胞外基質(zhì)，維持正常的纖維環(huán)結(jié)構(gòu)和功能。  
細胞特性  
1)組織來源于實驗動物的正常椎間盤組織。  
2)細胞鑒定：Ⅱ型膠原(Collagen Ⅱ)或Ⅰ型膠原(Collagen Ⅰ)免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。  
5)細胞生長方式：多角形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。  
髓核細胞  
細胞詳述  
髓核是乳白色半透明膠狀體，富于彈性，為椎間盤結(jié)構(gòu)的一部分，位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間。由縱橫交錯的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)即軟骨細胞和蛋白多糖黏液樣基質(zhì)構(gòu)成的彈性膠凍物質(zhì)。髓核細胞的過早衰老與凋亡是導(dǎo)致椎間盤退行性變過程的主要原之一，主要表現(xiàn)為退變椎間盤內(nèi)髓核細胞功能降低和數(shù)量減少，使得其Ⅱ型膠蛋白聚糖等基質(zhì)分泌量下降，zui終導(dǎo)致椎間盤維持脊柱高度、承受各方應(yīng)力等生物力學(xué)功能喪失。  
細胞特性  
1)組織來源于實驗動物的正常椎間盤組織。  
2)細胞鑒定：Ⅱ型膠原(Collagen Ⅱ)免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。  
5)細胞生長方式：梭形或多角形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。  
破骨細胞  
細胞詳述  
破骨細胞(osteoclast，亦稱bone-resorbing cells)是骨組織成分的一種，行使骨吸收（bone resorption）的功能。破骨細胞與成骨細胞（osteoblast，亦稱bone-forming cells）在功能上相對應(yīng)。二者協(xié)同，在骨骼的發(fā)育和形成過程中發(fā)揮重要作用。高表達的抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase)和組織蛋白酶K（cathepsin K)是破骨細胞主要標(biāo)志。  
細胞特性  
1)組織來源于實驗動物的正常關(guān)節(jié)組織。  
2)細胞鑒定：抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)為陽性。  
3)鑒定細胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。  
5)細胞生長方式：圓形，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。  
皮膚成纖維細胞  
細胞詳述  
成纖維細胞屬于由中胚層分化而來的間質(zhì)細胞。由于這些細胞非常容易培養(yǎng)，它們已被廣泛用于細胞和分子生物學(xué)研究中。一般而言，成纖維細胞能夠分泌I型和III型膠原等細胞外基質(zhì)，并且研究表明不同器官中的成纖維細胞有顯著的不同。傷口修復(fù)時，真皮成纖維細胞由可增殖，可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的，可