上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時(shí)間:2017-06-06 10:21:31瀏覽次數(shù):285
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細(xì)胞名稱 人胚腎二倍體細(xì)胞;HEK-2
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系來自一女性胎兒的正常腎組織。昆明細(xì)胞庫(kù)于1986年建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況 P4
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類人胚腎二倍體細(xì)胞;HEK-2
實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一) 前處理 用臺(tái)稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動(dòng)物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時(shí)后,將動(dòng)物處死,用剪刀剪開皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨,用注射器(內(nèi)裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細(xì)胞到離心管中,經(jīng)平衡后離心8分鐘,速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1~2次,離心的速度與時(shí)間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片,每片滴3滴細(xì)胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細(xì)胞均勻分散,在酒精燈火焰上來回烤一下,以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細(xì)觀察兩棲類染色體的數(shù)目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項(xiàng):
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
細(xì)胞詳述
胰島細(xì)胞分泌胰高血糖素,與胰島素一起發(fā)揮作用來發(fā)揮調(diào)節(jié)血糖的水平。胰島根據(jù)其分泌激素的功能可分為:β細(xì)胞、α細(xì)胞、δ細(xì)胞、胰島PP細(xì)胞。體外培養(yǎng)胰島細(xì)胞為胰島移植、胰島素分泌機(jī)制和降糖藥物作用機(jī)制等研究提供了前提和基礎(chǔ)。
細(xì)胞特性
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常胰腺組織。
2)細(xì)胞鑒定:雙硫腙(DTZ)化學(xué)染色染色為陽性。
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式:島狀成團(tuán)生長(zhǎng),貼壁培養(yǎng)。
胰島β細(xì)胞
細(xì)胞詳述
胰島細(xì)胞分泌胰高血糖素,與胰島素一起發(fā)揮作用來發(fā)揮調(diào)節(jié)血糖的水平。胰島根據(jù)其分泌激素的功能可分為:β細(xì)胞、α細(xì)胞、δ細(xì)胞、胰島PP細(xì)胞。其中,能分泌胰島素,與胰島A細(xì)胞分泌的胰高血糖素一起起到調(diào)節(jié)血糖的作用。胰島β細(xì)胞功能受損、胰島素分泌或相對(duì)不足(胰島素抵抗),會(huì)使血糖升高,從而引發(fā)糖尿病。而胰島β細(xì)胞癌變會(huì)生成胰島素瘤,引起惡性血糖降低癥狀。
細(xì)胞特性
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常胰腺組織。
2)細(xì)胞鑒定:胰島素(Insulin)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式:上皮樣,多角形細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
垂體細(xì)胞
細(xì)胞詳述
垂體是機(jī)體的重要的內(nèi)分泌腺體,由生長(zhǎng)激素和促腎上腺皮質(zhì)激素細(xì)胞等細(xì)胞構(gòu)成,在機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育、生命活動(dòng)、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)以及衰老死亡過程中起著重要意義。此,垂體細(xì)胞的體外培養(yǎng)為進(jìn)一步研究垂體與
生殖的神內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機(jī)制及垂體移植研究等方面提供了基礎(chǔ)和前提。
細(xì)胞特性
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常垂體組織。
2)細(xì)胞鑒定:LH、FSH與PRL免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式:梭形或多角形細(xì)胞,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
胸腺細(xì)胞
細(xì)胞詳述
胸腺作為哺乳動(dòng)物的中樞免疫器官,不僅是T淋巴細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟,同時(shí)向外周T細(xì)胞庫(kù)輸出T淋巴細(xì)胞的場(chǎng)所。胸腺細(xì)胞密集于皮質(zhì)內(nèi),其表達(dá)自身抗原