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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時間：2017-06-01 09:11:16瀏覽次數(shù)：352
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公司是*的ATCC細(xì)胞供應(yīng)商，提供恒河猴腎細(xì)胞；LLC-MK2的報價，咨詢，稱技術(shù)服務(wù)，咨詢選購。
細(xì)胞名稱 恒河猴腎細(xì)胞；LLC-MK2
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞
生長特性 貼壁生長
特征特性 LLC-MK2細(xì)胞株源自六只成年綠猴的腎細(xì)胞懸液。 據(jù)報道這個細(xì)胞對很多病毒敏感，包括腸道病毒、鼻病毒、粘病毒和痘病毒家族中的成員。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環(huán)境：首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無菌、無毒的環(huán)境，即對培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過程中的污染。
2、營養(yǎng)物質(zhì)：細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。
3、溫度和pH：細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。
4、氣體環(huán)境：培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
IL15 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IL15 基因全長ORF克隆
FGF20 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 FGF20 基因全長ORF克隆
IFNAR1 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR1 基因全長ORF克隆
IFNAR2 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR2 基因全長ORF克隆
EDAR cDNA Cynomolgus 食蟹猴 EDAR 基因全長ORF克隆
EDA2R cDNA Cynomolgus 食蟹猴 EDA2R 基因全長ORF克隆
TNFRSF14 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 TNFRSF14 基因全長ORF克隆
IFNA13 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IFNA13 基因全長ORF克隆
IFNA14 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IFNA14 基因全長ORF克隆
IFNA8 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IFNA8 基因全長ORF克隆
IFNA2 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IFNA2 基因全長ORF克隆
IFNB1 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IFNB1 基因全長ORF克隆
TNFRSF17 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 TNFRSF17 基因全長ORF克隆
TNFRSF1B cDNA Cynomolgus 食蟹猴 TNFRSF1B 基因全長ORF克隆
LTBR cDNA Cynomolgus 食蟹猴 LTBR 基因全長ORF克隆
TNFRSF10D cDNA Cynomolgus 食蟹猴 TNFRSF10D / TRAILR4 基因全長ORF克隆
TNFRSF1A cDNA Cynomolgus 食蟹猴 TNFRSF1A 基因全長ORF克隆
TNFSF10 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 TNFSF10 基因全長ORF克隆
CD40 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 CD40 基因全長ORF克隆
CD40LG cDNA Cynomolgus 食蟹猴 CD40LG 基因全長ORF克隆
TNFSF13 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 TNFSF13 基因全長ORF克隆
TNFSF12 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 TNFSF12 基因全長ORF克隆
FGF14 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 FGF14 基因全長ORF克隆
LTB cDNA Cynomolgus 食蟹猴 LTB 基因全長ORF克隆
TNFSF8 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 TNFSF8 基因全長ORF克隆
TNFSF14 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 TNFSF14 基因全長ORF克隆
CD70 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 CD70 基因全長ORF克隆
TNFSF4 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 TNFSF4 基因全長ORF克隆
FGF10 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 FGF10 基因全長ORF克隆
LTA cDNA Cynomolgus 食蟹猴 LTA 基因全長ORF克隆
IGFBP1 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP1 基因全長ORF克隆
IGFBP3 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP3 基因全長ORF克隆
IGFBP2 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP2 基因全長ORF克隆
IGF1R cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IGF1R 基因全長ORF克隆
NOV cDNA Cynomolgus 食蟹猴 NOV 基因全長ORF克隆
IGFBP4 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP4 基因全長ORF克隆
XCL1 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 XCL1 基因全長ORF克隆
CXCL14 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 CXCL14 基因全長ORF克隆
CCL17 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 CCL17 基因全長ORF克隆
