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公司是*的ATCC細(xì)胞供應(yīng)商，提供非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS4A；Vero-HCV-NS4A的報(bào)價(jià)，咨詢，稱技術(shù)服務(wù)，咨詢選購。
細(xì)胞名稱     非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS4A；Vero-HCV-NS4A        
形態(tài)特性      上皮樣細(xì)胞        
生長特性     貼壁生長        
特征特性      Vero-HCV-NS4A細(xì)胞整合有丙型肝炎病毒的NS4A基因，能穩(wěn)定表達(dá)NS4A蛋白，是HCV基礎(chǔ)研究的*摸型。它由武漢大學(xué)病毒學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室郭佳博士于2008年構(gòu)建并保存。         
培養(yǎng)條件      DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS         
傳代方法      1:3傳代,2-3天傳一代        
傳代情況     C24        
凍存條件      基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS         
支原體檢測     陰性         
STR             
同工酶     同工酶鑒定        
染色體             
使用權(quán)限     A類
培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環(huán)境：首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無菌、無毒的環(huán)境，即對培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過程中的污染。

2、營養(yǎng)物質(zhì)：細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。

3、溫度和pH：細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。

4、氣體環(huán)境：培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。

ADIPOQ     cDNA    Mouse    小鼠 ADIPOQ 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
ADIPOQ     cDNA    Mouse    小鼠 ADIPOQ 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CTLA4     cDNA    Mouse    小鼠 CTLA4 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
CTLA4     cDNA    Mouse    小鼠 CTLA4 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
PDGFA     cDNA    Mouse    小鼠 PDGFA 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
PDGFA     cDNA    Mouse    小鼠 PDGFA 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CD80     cDNA    Mouse    小鼠 B7-1 / CD80 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
CD80     cDNA    Mouse    小鼠 B7-1 / CD80 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CD5     cDNA    Mouse    小鼠 CD5 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
TIMD4     cDNA    Mouse    小鼠 TIMD4 / TIM4 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
TNFSF13B     cDNA    Mouse    小鼠 BAFF / TNFSF13B 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
TNFSF13B     cDNA    Mouse    小鼠 BAFF / TNFSF13B 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
TNFSF11     cDNA    Mouse    小鼠 TNFSF11 / CD254 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
RSPO1     cDNA    Mouse    小鼠 RSPO1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
RSPO1     cDNA    Mouse    小鼠 RSPO1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
ANGPT2     cDNA    Mouse    小鼠 ANGPT2 / ANG2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
ANGPT2     cDNA    Mouse    小鼠 ANGPT2 / ANG2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
TGFBR1     cDNA    Mouse    小鼠 TGFBR1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
IL13     cDNA    Mouse    小鼠 IL13 / ALRH 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
IL13     cDNA    Mouse    小鼠 IL13 / ALRH 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
TNFSF10     cDNA    Mouse    小鼠 TNFSF10 / TRAIL 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
TNFSF10     cDNA    Mouse    小鼠 TNFSF10 / TRAIL 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
TLR3     cDNA    Mouse    小鼠 TLR3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
VEGFA     cDNA    Mouse    小鼠 VEGF-A 轉(zhuǎn)錄變體3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
VEGFA     cDNA    Mouse    小鼠 VEGF-A 轉(zhuǎn)錄變體3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽