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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時(shí)間:2017-06-01 08:28:10瀏覽次數(shù):275
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細(xì)胞名稱 人胚肺二倍體細(xì)胞;2BS
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 人胚肺二倍體細(xì)胞,來(lái)自于女孩胚胎,1976年由北京生物制品研究所建株
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 新生牛血清,10%;水解乳蛋白,10%
傳代方法 1:2-1:4
傳代情況 P21
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%牛血清+10%DMSO
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X; D7S820:8,11;CSF1PO:10,12;D13S317:8,11;D16S539:9,12;D18S51:14,17;D21S11:29,30;D3S1358:15;D5S818:11;D8S1179:11,13;FGA:19,22;PentaD:11,13;PentaE:7,11;TH01:7,9;TPOX:8,10;vWA:18
同工酶 人B,NP,G7PG,MD,AST
染色體
使用權(quán)限 A類
人胚肺二倍體細(xì)胞;2BS實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一) 前處理 用臺(tái)稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動(dòng)物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時(shí)后,將動(dòng)物處死,用剪刀剪開(kāi)皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來(lái)回搓干凈。剪開(kāi)兩端股骨,用注射器(內(nèi)裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細(xì)胞到離心管中,經(jīng)平衡后離心8分鐘,速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1~2次,離心的速度與時(shí)間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片,每片滴3滴細(xì)胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細(xì)胞均勻分散,在酒精燈火焰上來(lái)回烤一下,以助染色體更好分散和展開(kāi)。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細(xì)觀察兩棲類染色體的數(shù)目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項(xiàng):
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們。
2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
NP cDNA H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體, 密碼子優(yōu)化), 無(wú)標(biāo)簽
NP cDNA H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體, 密碼子優(yōu)化), 無(wú)標(biāo)簽
NA cDNA H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase/NA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體, 密碼子優(yōu)化), 無(wú)標(biāo)簽
NA cDNA H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase/NA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體, 密碼子優(yōu)化), 無(wú)標(biāo)簽
M1 cDNA H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) Matrix protein 1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體, 密碼子優(yōu)化), 無(wú)標(biāo)簽
HA cDNA H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體, 密碼子優(yōu)化), 無(wú)標(biāo)簽
HA cDNA H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體, 密碼子優(yōu)化), 無(wú)標(biāo)簽
HA cDNA H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體, 密碼子優(yōu)化), 無(wú)標(biāo)簽
HA cDNA H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體, 密碼子優(yōu)化), 無(wú)標(biāo)簽
HA cDNA H7N7 甲型流感 H7N7 (A/chicken/Netherlands/1/03) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體, 密碼子優(yōu)化), 無(wú)標(biāo)簽
HA cDNA H7N7 甲型流感 H7N7 (A/Netherlands/219/2003) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因ORF克隆 (非全長(zhǎng))(密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
PDCD1 cDNA Mouse 小鼠 PD1 / PDCD1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
OGN cDNA Mouse 小鼠 OGN 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
LIF cDNA Human 人 LIF 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
TRIM63 cDNA Human 人 TRIM63 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
FSTL1 cDNA Human 人 FSL1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
SRC cDNA Human 人 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
RPGR cDNA Human 人 RPGR 轉(zhuǎn)錄變體A 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
BMP2 cDNA Human 人 BMP-2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽