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上海莼試生物技術(shù)有限公司

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上皮細(xì)胞樣
上皮細(xì)胞樣
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更新時(shí)間:2017-06-01 08:11:39瀏覽次數(shù):521

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【簡(jiǎn)單介紹】
上皮細(xì)胞樣,收到細(xì)胞時(shí),若干冰已經(jīng)*融化,請(qǐng)立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng);若尚留有干冰,請(qǐng)立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用,請(qǐng)按條件貯存細(xì)胞,切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。

形態(tài)特性      上皮細(xì)胞樣        
生長(zhǎng)特性     貼壁生長(zhǎng)         
特征特性      該細(xì)胞屬源于正常腎的近曲小管細(xì)胞,通過(guò)導(dǎo)入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉(zhuǎn)染外生包裝細(xì)胞Psi-2,Psi-2細(xì)胞產(chǎn)生的病毒再去感染兼嗜性包裝細(xì)胞系PA317,zui后將PA317產(chǎn)生的病毒顆粒導(dǎo)入正常的腎皮質(zhì)近曲小管細(xì)胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有抗性,但未用G418篩選轉(zhuǎn)導(dǎo)克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細(xì)胞來(lái)源于單克隆。PCR檢測(cè)證實(shí)HK-2細(xì)胞基因組中含有E6/E7基因。         
培養(yǎng)條件      DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium)  10%FBS         
傳代方法      1:4傳代;2~3天換液1次。        
傳代情況     P9        
凍存條件      基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS         
支原體檢測(cè)     培養(yǎng)法(-)         
STR      Amelogenin:X;CSF1PO:13;D13S317:9;D16S539:11,12;D18S51:12;D19S433:15,15.2;D21S11:28,30;D2S1338:17,25;D3S1358:16,17;D5S818:12;D7S820:10,11;D8S1179:10,14;FGA:20,22;TH01:9;TPOX:8,9;vWA:17,18;        
同工酶             
染色體      57~60        
使用權(quán)限     A類    

上皮細(xì)胞樣實(shí)驗(yàn)方法和步驟 
(一) 前處理 用臺(tái)稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動(dòng)物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。 
(二) 取材 注射4小時(shí)后,將動(dòng)物處死,用剪刀剪開(kāi)皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來(lái)回搓干凈。剪開(kāi)兩端股骨,用注射器(內(nèi)裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細(xì)胞到離心管中,經(jīng)平衡后離心8分鐘,速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘。 
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間。
 (四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1~2次,離心的速度與時(shí)間以上述相同。
 (五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片,每片滴3滴細(xì)胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細(xì)胞均勻分散,在酒精燈火焰上來(lái)回烤一下,以助染色體更好分散和展開(kāi)。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細(xì)觀察兩棲類染色體的數(shù)目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項(xiàng):
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們。
2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

CDH1     MAb    Human    E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 兔單抗     ELISA   
CDH1     MAb    Human    E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 兔單抗     ELISA   
DMP1     MAb    Human    DMP1 兔單抗     ELISA   
TP53     MAb    Cynomolgus    p53 / TP53 兔單抗     ELISA   
FCGR2A     MAb    Cynomolgus    CD32a / Fc gamma RIIA / FCGR2A 兔單抗     ELISA   
FCGR2B     MAb    Cynomolgus    CD32b / Fc gamma RIIB 兔單抗     ELISA   
CXCL9     MAb    Human    CXCL9 / MIG 兔單抗     ELISA   
CXADR     MAb    Human    CXADR 兔單抗     ELISA   
CXADR     MAb    Human    CXADR 兔單抗     ELISA   
CTSL1     MAb    Human    Cathepsin L1 / CTSL1 兔單抗     ELISA   
CTSD     MAb    Human    Cathepsin D / CTSD 兔單抗     ELISA   
CTSD     MAb    Human    Cathepsin D / CTSD 兔單抗     ELISA   
CTLA4     MAb    Human    CTLA-4 / CD152 兔單抗     ELISA   
CTHRC1     MAb    Human    CTHRC1 兔單抗     ELISA   
CHI3L2     MAb    Human    CHI3L2 / YKL-39 兔單抗     ELISA   
CDON     MAb    Human    CDON 兔單抗     ELISA   
CD160     MAb    Human    CD160 兔單抗     ELISA   
CD46     MAb    Human    CD46 兔單抗     ELISA   
FCER2     MAb    Human    CD23 / FCER2 兔單抗     ELISA   
CD22     MAb    Human    CD22 兔單抗     ELISA   
CD19     MAb    Human    CD19 兔單抗     ELISA   
CD19     MAb    Human    CD19 兔單抗     ELISA   
CD14     MAb    Human    CD14 兔單抗     ELISA   
CCL15     MAb    Human    CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 兔單抗     ELISA   
MET     MAb    Canine    c-MET / HGFR 兔單抗     ELISA   
MET     MAb    Canine    c-MET / HGFR 兔單抗     ELISA   
CA13     MAb    Human    Carbonic Anhydrase XIII / CA13 兔單抗     ELISA   
BID     MAb    Human    BID 兔單抗     ELISA   
BID     MAb    Human    BID 兔單抗     ELISA   
CANT1     MAb    Human    PLAUR / CD87 / uPAR 兔單抗     ELISA   
TREML2     MAb    Human    TREML2 / TLT-2 兔單抗     ELISA   
SIGIRR     MAb    Human    SIGIRR / TIR8 兔單抗     ELISA   
SCGB1A1     MAb    Human    Uteroglobin / SCGB1A1 兔單抗     ELISA   
KITLG     MAb    Human    SCF / C-kit ligand 兔單抗     ELISA   
SFTPD     MAb    Cynomolgus    SFTPD / SP-D / SFTP4 兔單抗     ELISA   
EPHA2     MAb    Mouse    EphA2 兔單抗     ELISA   
CTSE     MAb    Mouse    Cathepsin E / CTSE 兔單抗     ELISA   
KLK8     MAb    Human    KLK8 / Kallikrein 8 兔單抗     ELISA   
F11     MAb    Human    Coagulation Factor XI / F11 兔單抗     ELISA   
CHI3L1     MAb    Human    CHI3L1 / YKL40 兔單抗     ELISA   
CFD     MAb    Human    Adipsin / Complement Factor D / CFD 兔單抗     ELISA   
CD48     MAb    Mouse    CD48 / SLAMF2 兔單抗 (PE)     FCM   
SELL     MAb    Mouse    CD62L / L-Selectin / SELL 兔單抗 (PE)     FCM   

 



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