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上海莼試生物技術(shù)有限公司

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鵝同型半ELISA檢測試劑盒?操作步驟

2021-10-19  閱讀(123)

鵝同型半ELISA檢測試劑盒操作步驟:

1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘。

MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞

MM, 小鼠小膠質(zhì)細胞

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 細胞名稱

人絨毛膜毛細血管內(nèi)皮細胞

人羊膜上皮細胞

人絨毛間充質(zhì)成纖維細胞

人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細胞

人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細胞

 細胞名稱

NRK-52E,大鼠腎細胞

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大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)

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CHO, 中國倉鼠卵巢細胞系

COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細胞

SF9, 昆蟲卵巢細胞

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HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞

HET-1A, 人食管上皮細胞

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293T, SV40轉(zhuǎn)化的人胚腎上皮細胞系




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