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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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假結(jié)核耶爾森菌PCR檢測試劑盒產(chǎn)生非特異性條帶方法
2020-8-12 閱讀(176)
假結(jié)核耶爾森菌PCR檢測試劑盒產(chǎn)生非特異性條帶
1)用RT陰性對照檢測是否被基因組DNA污染。如果RT陰性對照的PCR結(jié)果也顯示同樣條帶，則需要用DNase I重新處理樣品。
2)在PCR反應(yīng)中，非特異的起始擴(kuò)增將導(dǎo)致產(chǎn)生非特異性結(jié)果。在低于引物Tm 2至5℃的溫度下進(jìn)行退火，降低鎂離子或是目的DNA的量將減少非特異性結(jié)果的產(chǎn)生。
3)由于mRNA剪切方式的不同，根據(jù)選擇引物的不同將導(dǎo)致產(chǎn)生不同的RT-PCR結(jié)果。
產(chǎn)生彌散（smear）條帶
1)在PCR反應(yīng)體系中一鏈產(chǎn)物的含量過高
2)減少引物的用量
3)優(yōu)化PCR反應(yīng)條件/減少PCR的循環(huán)次數(shù)
4)在用DNase處理被DNA污染的RNA樣品時，其產(chǎn)生的寡核苷酸片段會產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增，一般會顯示為彌散背景。
