 |
上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品： ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價(jià)格，ELISA試劑盒報(bào)價(jià) |
員.png)
聯(lián)系電話
13585831301
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 李小姐
- 電話：
- 021-59541103
- 手機(jī)：
- 13585831301
- 售后電話：
- 13585831301
- 傳真：
- 021-60443211
- 地址：
- 上海市嘉定區(qū)嘉羅公路1661號
- 郵編：
禽副粘病毒型PCR檢測試劑盒產(chǎn)生非特異性條帶因素
2020-6-18 閱讀(181)
禽副粘病毒型PCR檢測試劑盒產(chǎn)生非特異性條帶:
1)用RT陰性對照檢測是否被基因組DNA污染。如果RT陰性對照的PCR結(jié)果也顯示同樣條帶，則需要用DNase I重新處理樣品。
2)在PCR反應(yīng)中，非特異的起始擴(kuò)增將導(dǎo)致產(chǎn)生非特異性結(jié)果。在低于引物Tm 2至5℃的溫度下進(jìn)行退火，降低鎂離子或是目的DNA的量將減少非特異性結(jié)果的產(chǎn)生。
3)由于mRNA剪切方式的不同，根據(jù)選擇引物的不同將導(dǎo)致產(chǎn)生不同的RT-PCR結(jié)果。
產(chǎn)生彌散（smear）條帶
1)在PCR反應(yīng)體系中一鏈產(chǎn)物的含量過高
2)減少引物的用量
3)優(yōu)化PCR反應(yīng)條件/減少PCR的循環(huán)次數(shù)
4)在用DNase處理被DNA污染的RNA樣品時(shí)，其產(chǎn)生的寡核苷酸片段會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增，一般會(huì)顯示為彌散背景。
產(chǎn)生大分子量的彌散條帶
1)大多數(shù)情況下是由于退火溫度過低而導(dǎo)致的非特異性的起始及延伸產(chǎn)生的
2)對于長片段的PCR，建議將反應(yīng)體系中cDNA的濃度稀釋至1:10（或1:100-1:200）
6. 在無反轉(zhuǎn)錄酶的情況下，對照RNA獲得擴(kuò)增結(jié)果詳細(xì)解析關(guān)于Elisa試劑盒的儲(chǔ)存于有效期多久
