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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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脫落酸（ABA）含量ELISA測(cè)試盒操作流程
2020-5-7 閱讀(324)
脫落酸(ABA)含量ELISA測(cè)試盒操作流程：
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3. 樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
本試劑盒應(yīng)用間接競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定標(biāo)本中脫落酸含量。用純化的脫落酸標(biāo)準(zhǔn)品包被微孔板，制成固相抗原。樣品中脫落酸與固相抗原競(jìng)爭(zhēng)抗體，再利用HRP標(biāo)記的二抗催化底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)
化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脫落酸含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中脫落酸濃度。
