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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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pRB視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制蛋白ELISA試劑盒操作步驟
2023-5-9 閱讀(86)
pRB視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制蛋白ELISA試劑盒操作步驟:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。
ARSA英文名稱：芳香基硫酸酯酶1抗體
ATXN7L1英文名稱：共濟(jì)失調(diào)蛋白7樣1抗體
AUTS2英文名稱：孤獨(dú)癥易感基因2蛋白抗體（自閉癥相關(guān)蛋白1）
ATX2英文名稱：脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)2型蛋白抗體
ARSH英文名稱：芳香基硫酸酯酶H抗體
ACF1英文名稱：溴區(qū)結(jié)構(gòu)域相鄰鋅指蛋白1A抗體
Apo-1英文名稱：載脂蛋白1抗體
Amisyn英文名稱：突觸融合結(jié)合蛋白6抗體
AKD1英文名稱：腺苷酸激酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體
ABCA7英文名稱：三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白7抗體
phospho-Na+/K+-ATPase Alpha1(Ser 943)英文名稱：磷酸化鈉鉀ATP酶α1多肽抗體
ATP1A1英文名稱：Na+/K+-ATPase α1 鈉鉀ATP酶α1抗體
BAF53b英文名稱：肌動(dòng)蛋白樣蛋白6B抗體
Ataxin 7英文名稱：脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白7抗體
