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泛素特異性蛋白酶Otubain2抗體的生w素化標記實驗要點

2023-1-10  閱讀(174)

泛素特異性蛋白酶Otubain2抗體的生w素化標記實驗要點:


1. 新型血小板相關內(nèi)皮分泌蛋白SCUBE1抗體費用 如在反應混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標記反應。因此,蛋白質(zhì)在反應前要對 0.1mol/L碳suan氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;


2.所用的NHSB及待生wu素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應先用幾個不同的分子比來篩選最適條件;


3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點可能因此被封閉,導致抗體失活;


4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生wu素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;


5.當游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點時,或位于酶的催化位點時,生wu素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;


6.生wu素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及ben酚基,也可與糖基共價結(jié)合;


7.交聯(lián)反應后,應充分透析,否則,殘余的生wu素會對生wu素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;


8.在細胞的熒光標記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導致高本底。


小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(mouse ACE)

小鼠雄激素結(jié)合蛋白(mouse ABP)

小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(mouse ACTH)

小鼠Active Caspase-3

小鼠Active Caspase-7

小鼠Active Caspase-8

小鼠激活素A(mouse Activin A)

小鼠脂聯(lián)素(mouse Adiponectin)

小鼠抗線粒體抗體(mouse AMA)

小鼠抗核抗體(mouse ANA)

小鼠血管緊張素II(mouse ANG II)

小鼠血管生成素-2(mouse Angiopoietin-2)

小鼠心鈉素(mouse ANP)

小鼠凋亡誘導因子(mouse AIF)

小鼠抗利尿激素/血管加壓素(mouse AVP/ADH)

小鼠醛固酮(mouse ALD)

小鼠白蛋白(mouse Albumin)

小鼠血管抑素(mouse Angiostatin)

小鼠載脂蛋白E(mouse APO E)

小鼠B淋巴細胞刺激因子(mouse BAFF)

小鼠凋亡因子BAX(mouse BAX)

小鼠細胞凋亡相關基因(mouse BCL-2)

小鼠腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子(mouse BDNF)

小鼠腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子受體(mouse BDNF R)

小鼠骨成型蛋白-2(mouse BMP-2)

小鼠骨成型蛋白-4(mouse BMP-4)




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