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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)操作
2022-12-20 閱讀(112)
人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)操作:
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml yi酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.2）250g用于樣品稀釋。（WS）
卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)250g加入卵黃，用于厭氧梭狀芽孢桿菌的分離培養(yǎng)
庖肉牛肉粒100g加入庖肉培養(yǎng)基基礎(chǔ)(027140)，用于厭氧菌的增菌培養(yǎng)和保存，還用于厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗
庖肉培養(yǎng)基基礎(chǔ)250g加入皰肉牛肉粒(027150)，用于厭氧菌的增菌培養(yǎng)和保存，還用于厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗。
麥芽浸膏湯250g用于酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗
錳鹽營養(yǎng)瓊脂250g用于嗜溫和嗜熱需氧芽孢桿菌的檢測
酸性肉湯250g用于酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗
溴甲酚紫葡萄糖肉湯250g用于低酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗
血平板 (成品培養(yǎng)基)20個/盒用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗
哥倫比亞血平板(成品培養(yǎng)基)20個/盒用于一般病原菌的分離培養(yǎng)和溶血性細(xì)菌的鑒別
改良克氏雙糖培養(yǎng)基250g用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的鑒定
硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基250g用于鑒別綠膿桿菌分解硝酸鹽產(chǎn)氣試驗
半固體瓊脂250g供細(xì)菌動力觀察、菌種保存，H抗原位相變異試驗等。(美國FDA、SN、GB)
3%氯化鈉三糖鐵瓊脂250g用于副溶血性弧菌的生化反應(yīng)。(GB、SN)
血瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)250g加入脫纖維羊血或兔血，制成血瓊脂培養(yǎng)基，用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗
葡萄糖銨培養(yǎng)基100g
尿素瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)250g用于鑒別腸道菌尿素酶試驗
緩沖動力-硝酸鹽培養(yǎng)基250g供產(chǎn)氣莢膜梭菌動力和硝酸鹽還原測定用
