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上海莼試生物技術(shù)有限公司

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胖大海LAMP鑒定試劑盒使用方法

2022-8-30  閱讀(117)

胖大海LAMP鑒定試劑盒使用方法:

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。


1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。


2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。


3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。


4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。


5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。


6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。


二、樣品 DNA 的制備


7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。


8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。


三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)


9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照(用第一步稀釋得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)系列稀釋液的第 4 號(hào)做模板)。

活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體

銜接蛋白β抗體

銜接蛋白γ/γ-Adaptin抗體

水通道蛋白-9抗體

膜粘連蛋白A3抗體

膜粘連蛋白 A4抗體

自噬相關(guān)蛋白8A抗體

磷酸化蛋白激酶B抗體

磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體

磷酸化蛋白激酶B抗體

脫氧胞苷脫氨酶蛋白抗體

蛋白激酶錨定蛋白13抗體

AP-1μ2抗體

肥大細(xì)胞膜抑制性受體Allergin1抗體

腦鈉通道蛋白1抗體

肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合亞單位B1抗體

三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體

甲胎蛋白抗體

毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體

ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體

肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白LIM蛋白3抗體

酸性鈣調(diào)蛋白3抗體

磷酸化CD156b抗體




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