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南京金益柏生物科技有限公司
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更新時間:2017-04-19 13:42:18瀏覽次數(shù):169次
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豬藍(lán)耳 定性ELISA試劑盒 ★南京金益柏★ELISA 提問:ELISA中的棋盤滴定法?回答:這是我做雙抗體夾心ELISA時設(shè)計的方案,你可以參考一下。
棋盤滴定法選擇抗體的Z適工作濃度
a)用包被緩沖液稀釋單克隆抗體,濃度分別為10ug/ml、5.0ug/ml、2.5ug/ml、1.0ug/ml,包被酶標(biāo)板,每一濃度包被三個縱行,每孔100ul,每孔均作復(fù)孔。4℃過夜,PBST洗滌3次;
豬藍(lán)耳 定性ELISA試劑盒 ★南京金益柏★ELISA 提問:ELISA中的棋盤滴定法?回答:這是我做雙抗體夾心ELISA時設(shè)計的方案,你可以參考一下。
棋盤滴定法選擇抗體的zui適工作濃度
a)用包被緩沖液稀釋單克隆抗體,濃度分別為10ug/ml、5.0ug/ml、2.5ug/ml、1.0ug/ml,包被酶標(biāo)板,每一濃度包被三個縱行,每孔100ul,每孔均作復(fù)孔。4℃過夜,PBST洗滌3次;
b)5%脫脂奶粉封閉酶標(biāo)板,37℃孵育1h,洗滌3次;
c)在橫行包被孔中依次加入空白對照,陰性對照血清,弱陽性抗原液及強陽性抗原液,各100ul,37℃孵育1h,洗滌3次;
d)在每一包被濃度的一個縱行中分別加入按1:2000、1:5000、1:10000稀釋的多抗,37℃孵育1h,洗滌3次;
e)在每一包被濃度的一個縱行中分別加入HRP標(biāo)記IgG抗體,稀釋度先按說明書上的,37℃孵育1h,洗滌3次;
f)加TMB底物,37℃避光顯色10-15min,用2mol/LH2SO4終止反應(yīng),酶標(biāo)儀450nm讀取吸光度(OD)值;
g)測得的強陽性抗原液OD值在1.0左右,陰性對照OD值小于0.1的組合為較理想的組合。
可根據(jù)初步確定的濃度縮小間距,再做進一步棋盤滴定,尋找 包被條件。
抗體做稀釋時用同一個原始濃度做倍比稀釋,這樣可以盡量減少由于加樣槍造成的誤差及人為誤差。
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