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細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)（流式法或Tunel法）

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更新時(shí)間：2016-12-27 14:43:36瀏覽次數(shù)：1266次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過程，而是主動(dòng)過程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用，它并不是病理?xiàng)l件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng)爭(zhēng)取的一種死亡過程。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。它在生物體的進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個(gè)系統(tǒng)的

詳細(xì)介紹

流式法

一、服務(wù)介紹

二、實(shí)驗(yàn)原理

Annexin V/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡：在正常細(xì)胞中，磷脂酰*（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰*（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種Ca²⁺依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰*有高度親和力，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰*與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V 進(jìn)行熒光素標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin V作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但對(duì)凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開來。

三、實(shí)驗(yàn)流程

1.細(xì)胞培養(yǎng)，接種6孔板；

2.按的方式誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；

3.不含EDTA的*消化貼壁細(xì)胞并離心收集；

4.重懸細(xì)胞，加Annexin V/PI染色；

5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)；

6.結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。

四、服務(wù)說明

1.客戶提供：培養(yǎng)好的細(xì)胞以及所需藥品

2.公司提供：基本實(shí)驗(yàn)步驟、流式圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果、剩余藥品。

3.實(shí)驗(yàn)周期: 1-2周左右，具體需要根據(jù)細(xì)胞生長情況及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。

TUNEL法

二、實(shí)驗(yàn)原理

TUNEL法（terminal dexynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP 缺口末端標(biāo)記測(cè)定法），也稱DNA斷裂的原位末端標(biāo)記法。細(xì)胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個(gè)漸進(jìn)的分階段的過程，染色體DNA首先在內(nèi)源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300 kb的大片段，然后大約30%的染色體DNA在Ca2+和Mg2+依賴的核酸內(nèi)切酶作用下，在核小體單位之間被隨機(jī)切斷，形成180～200 bp核小體DNA多聚體。DNA雙鏈斷裂或只要一條鏈上出現(xiàn)缺口而產(chǎn)生的一系列DNA的3’-OH末端可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸化酶或*形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3’-末端，再用辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素與衍生物上*結(jié)合（每個(gè)鏈霉親和素至少可以再結(jié)合3個(gè)*分子），zui后用DAB、過氧化氫與辣根過氧化物酶發(fā)生氧化、環(huán)化反應(yīng)，形成苯乙肼聚合物而呈現(xiàn)棕褐色，zui終通過計(jì)數(shù)每張切片上不同視野中TUNEL陽性細(xì)胞的比例來判斷細(xì)胞凋亡發(fā)生情況。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3’-OH形成，很少能夠被染色。