(一)原代細胞培養(yǎng)  
1、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))  
    凡經(jīng)消化液處理實體組織來源的細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性，細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L，培養(yǎng)基可用Eagle(MEM)或DNEM培養(yǎng)，小牛血清濃度為10%～80%，有條件的應(yīng)在37℃ 5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂浮。若原代貼壁細胞不是用于長期培養(yǎng)，只是用于分離繁殖或測定病毒之用，其細胞濃度可以加大，盡量貼成厚層以利病毒的效價提高和測定結(jié)果（如空斑）更加明顯、準確，待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，此時的pH若有明顯變化，應(yīng)將原代細胞換液，即倒去舊液，換入新鮮的培養(yǎng)基，以便除去衰老、死亡的細胞和陳舊的培養(yǎng)基，使貼壁細胞能獲得充足的營養(yǎng)。  
若用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，可有少量的肌樣纖維間質(zhì)細胞或基質(zhì)細胞開始貼壁生長，為了利于該貼壁細胞充分貼壁和生長，此時換液應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后，按半量換液方式棄去舊液加入新液，然后再將細胞懸液放入原瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，經(jīng)反復(fù)幾次換液后，貼壁肌樣細胞逐漸形成網(wǎng)狀，此時換液可將原懸浮細胞和培養(yǎng)基移入另一新瓶，然后分別補加新鮮培養(yǎng)基(也按半量換液方式分別對半加入新液)繼續(xù)培養(yǎng)，原瓶的貼壁細胞逐漸長成單層，而新瓶中又會出現(xiàn)二次貼壁細胞，經(jīng)幾次換液也會逐漸長成單層，在此類細胞培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中往往需加入少量的維生素D3、bFGF、地塞米松、小牛血清（濃度要在20%以上），以利細胞貼壁生長。  
2、懸浮細胞的培養(yǎng)  
   凡來自外周血、胸腹水、脾臟、淋巴結(jié)、骨髓的淋巴細胞、造血干細胞以及白血病細胞，在原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞。若作用于試驗的短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，細胞濃度可在5～8×109/L范圍內(nèi)，然后進行分瓶試驗。若要將淋巴細胞及白血病細胞進行長期培養(yǎng)，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長，待細胞開始增殖甚至結(jié)成小團塊，培養(yǎng)基中pH變酸，說明細胞生長繁殖良好，一般每隔3天需半量換液一次（換液時盡量使細胞不丟失），待細胞增殖加快，濃度明顯增加，pH發(fā)生明顯變化時，此時可考慮傳代。但千萬不能急于傳代，一定要待細胞密度較高時才能進行，以防傳代失敗。