大鼠Salusinβ蛋白(Salusinβ)ELISA試劑盒elisa實驗的原理似乎很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個實驗。在實驗結(jié)束時，我們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景噪音會影響您對結(jié)果的判斷。如何降低ELISA的背景，下面有一些tips。
一、洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊，其實很重要，因為如果未結(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
二、封閉更關(guān)鍵
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。
如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩(wěn)定，在去除洗滌過程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時起作用，因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。
蛋白封閉液則有所不同，是*的。它們與開放位點結(jié)合并封閉，同時穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。
三、抗體濃度須優(yōu)化
我們通常會記錄每次試驗留下來的操作步驟，但是如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體結(jié)合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。
四、檢測試劑要適量
另一點也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時應(yīng)加入終止液。
如果您的ELISA不幸地遇到了高背景，那么也無需太擔心，依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分，并排除可能存在的問題。悉心優(yōu)化，相信很快就會有漂亮的結(jié)果。

大鼠Salusinβ蛋白(Salusinβ)ELISA試劑盒實驗測定具體步驟：
1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目，并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9；做雙份檢測時×2。其余重包裝好放如冰箱中。 
2．將標準品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中，1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細胞培養(yǎng)上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。 
3．酶標板加上蓋，37℃反應(yīng) 90 分鐘。 
4．反應(yīng)后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體；或甩去酶標板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。 不洗。 
5．將準備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。（TMB 空白顯色孔除 外）。37℃反應(yīng) 60 分鐘。 
6． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次，每次浸泡 1 分鐘左右。 
7．將準備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入（TMB 空白顯色孔除外）。37℃反應(yīng) 30 分鐘。 
8． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次，每次浸泡 1-2 分鐘左右。 
9．按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液，37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 （注意：顯色時間供參考，因用戶實驗室條件差異，顯色時間會有所不同。此時肉眼可 見標準品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍色，后 3-4 孔差別不明顯）。 
10．按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。 
11．用酶標儀在 450nm 測定 OD值。

大鼠Salusinβ蛋白(Salusinβ)ELISA試劑盒786-116    RNase-DETECT™    100 Tests
786-117    Water, DEPC-Treated    125ml
786-118    Water, DEPC-Treated    500ml
786-119    Western ReProbe™ [5X]    100ml
786-11X    CB-X™ Protein Assay (No BSA Standard)    500 Assays
786-120    UPPA-PROTEIN-Concentrate™ (Micro)    For 10ml Sample
786-121    UPPA-PROTEIN-Concentrate™ (Medi)    For 30ml Sample
786-122    UPPA™-I & II Pack    For >80ml 
786-123    PAGE-Perfect™    50 Preps
786-123T    PAGE-Perfect™    5 Preps
786-124    Perfect-FOCUS™    50 Preps
786-124T    Perfect-FOCUS™    6 Preps
786-125    OrgoSol-PROTEIN-Concentrate™    For 5ml Protein 
786-126    Column-PROTEIN-Concentrate™    For 4mg protein
786-127    OrgoSol DetergentOUT™ (Micro)    For 10ml Sample
786-128    OrgoSol DetergentOUT™ (Medi)    For 30ml Sample
786-129    SDS Detection Kit    15 Assays
786-12X    CB-X™ Protein Assay with Albumin Standard    500 Assays
786-12XT    CB-X™ Protein Assay    10 Assays
786-13    SG-Chymotrypsin™    2 x 25µg
786-130    Total Arrest™ RNA (Micro)    50 Preps
786-131    Total Arrest™ RNA (Medi)    10 Preps
786-132    GET™ Total RNA    50 Preps
786-133    Arrest™ Extraction Buffer    200 Preps
786-134    Yeast Geno-DNA-Template™    100 Preps
786-135    Plant Geno-DNA-Template™    100 Preps
786-136    OmniPrep™    150 Preps
786-137    Protease Screening Kit    50 Assays
786-138    Molecular Grinding Resin™    5 X 1ml
786-138P    Pestles & Tubes    100 Pestle & 100 Tubes
786-138PR    Molecular Grinding Resin™ with Pestles & Tubes    5 x 1ml with 100 Pestles & Tubes
786-139    EZ-Grind™    20 Pestle & 20 Tubes with Resin
786-14    SG-Lysine-C™    2 x 5µg