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馬免疫球蛋白G(IgG) ELISA試劑盒

時間:2017/3/7閱讀:452
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馬免疫球蛋白G(IgG) ELISA試劑盒血清樣本采集和檢測注意事項:
  1、血清標本可按常規(guī)方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
  2、 血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應。如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。
  3、一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。

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馬免疫球蛋白G(IgG) ELISA試劑盒可用作 ELISA 測定的標本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、 細胞培養(yǎng)上清、細胞、組織等均可作標本以測定其中某種成份。有些標本可直接進行測定,有些 則需經(jīng)預處理。 
● 血清: 
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。收集上清。如 有沉淀形成,應再次離心。 
● 血漿: 
應根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右 ( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形 成,應再次離心。 
●尿液、胸腹水、腦脊液: 
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形成, 應再次離心。
●細胞培養(yǎng)上清:
 檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細收集 上清。檢測細胞內(nèi)的 成份時,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。 
●細胞: 
檢測細胞的成份時,對于貼壁細胞,去除培養(yǎng)液,用PBS、理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加 入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞10 秒后,細胞 就會被裂解。對于懸浮細胞,離心收集細胞,用PBS、理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適 量裂解液, 用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉 淀。如果細胞量較多,必需分裝然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g離心3-5 分鐘,取上 清,即可進行后續(xù)操作。 
●組織標本: 
切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS 或組織蛋白萃取試劑,緩沖液中可加入蛋白酶抑制 劑。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細收集 上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

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