細(xì)胞培養(yǎng)基在水溶液提取需要注意的主要影響因素
　　
　　細(xì)胞培養(yǎng)基的提取一般以水溶液為主。稀鹽溶液和緩沖液對(duì)培養(yǎng)基的穩(wěn)定性好，溶解度大，是提取培養(yǎng)基和酶zui常用的溶劑。用水溶液提取生物大分子應(yīng)注意的幾個(gè)主要影響因素是：
　　
　　1)鹽濃度（即離子強(qiáng)度）：離子強(qiáng)度對(duì)生物大分子的溶解度有極大的影響，有些物質(zhì)，如DNA-蛋白復(fù)合物，在高離子強(qiáng)度下溶解度增加，而另一些物質(zhì)，如RNA-蛋白復(fù)合物，在低離子強(qiáng)度下溶解度增加，在高離子強(qiáng)度下溶解度減小。絕大多數(shù)培養(yǎng)基和酶，在低離子強(qiáng)度的溶液中都有較大的溶解度，如在純水中加入少量中性鹽，培養(yǎng)基的溶解度比在純水時(shí)大大增加，稱為"鹽溶"現(xiàn)象。但中性鹽的濃度增加至一定時(shí)，培養(yǎng)基的溶解度又逐漸下降，直至沉淀析出，稱為"鹽析"現(xiàn)象。鹽溶現(xiàn)象的產(chǎn)生主要是少量離子的活動(dòng)，減少了偶極分子之間極性基團(tuán)的靜電吸引力，增加了溶質(zhì)和溶劑分子間相互作用力的結(jié)果。所以低鹽溶液常用于大多數(shù)生化物質(zhì)的提取。通常使用0.02mol/L～0.05mol/L緩沖液或0.09mol/L～0.15mol/LNaCl溶液提取培養(yǎng)基和酶。不同的培養(yǎng)基極性大小不同，為了提高提取效率，有時(shí)需要降低或提高溶劑的極性。向水溶液中加入蔗糖或甘油可使其極性降低，增加離子強(qiáng)度（如加入KCl、NaCl、NH4Cl或(NH4)2SO4）可以增加溶液的極性。
　　
　　2)pH值：培養(yǎng)基、酶與核酸的溶解度和穩(wěn)定性與pH值有關(guān)。過酸、過堿均應(yīng)盡量避免，一般控制在pH=6～8范圍內(nèi)，提取溶劑的pH應(yīng)在培養(yǎng)基和酶的穩(wěn)定范圍內(nèi)，通常選擇偏離等電點(diǎn)的兩側(cè)。堿性培養(yǎng)基選在偏酸一側(cè)，酸性培養(yǎng)基選在偏堿的一側(cè)，以增加培養(yǎng)基的溶解度，提高提取效果。例如*為堿性培養(yǎng)基，常用稀酸提取，而肌肉甘油醛-3-磷酸脫氫酶屬酸性培養(yǎng)基，則常用稀堿來提取。
　　
　　3)溫度：為防止變性和降解，制備具有活性的培養(yǎng)基和酶，提取時(shí)一般在0℃～5℃的低溫操作。但少數(shù)對(duì)溫度耐受力強(qiáng)的培養(yǎng)基和酶，可提高溫度使雜蛋白變性，有利于提取和下一步的純化。
　　
　　4)防止蛋白酶或核酸酶的降解作用：在提取培養(yǎng)基、酶和核酸時(shí)，常常受自身存在的蛋白酶或核酸酶的降解作用而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗。為防止這一現(xiàn)象的發(fā)生，常常采用加入抑制劑或調(diào)節(jié)提取液的pH、離子強(qiáng)度或極性等方法使這些水解酶失去活性，防止它們對(duì)欲提純的培養(yǎng)基、酶及核酸的降解作用。例如在提取DNA時(shí)加入EDTA絡(luò)合DNAase活化所必須的Mg++。
　　
　　5)攪拌與氧化：攪拌能促使被提取物的溶解，一般采用溫和攪拌為宜，速度太快容易產(chǎn)生大量泡沫，增大了與空氣的接觸面，會(huì)引起酶等物質(zhì)的變性失活。因?yàn)橐话闩囵B(yǎng)基都含有相當(dāng)數(shù)量的巰基，有些巰基常常是活性部位的必需基團(tuán)，若提取液中有氧化劑或與空氣中的氧氣接觸過多都會(huì)使巰基氧化為分子內(nèi)或分子間的二硫鍵，導(dǎo)致酶活性的喪失。在提取液中加入少量巰基乙醇或半*以防止巰基氧化。