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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀:323發(fā)布時間:2012-11-9
在發(fā)育和干細胞生物學、癌癥研究和藥物開發(fā)中,測定細胞的增殖能力是一種基本方法。Life Technologies推出了一系列產品,可準確地測定細胞在整個細胞周期中的進程。Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor為單個細胞或細胞群體中的細胞周期進程提供了準確、靈敏的讀數(shù)。而Click-iT® EdU assay則能檢測進入DNA合成期的細胞,并將S期的細胞與其他細胞區(qū)分開來。研究細胞周期
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor是基于兩個細胞周期調控蛋白geminin和Cdt1,它們分別與綠色和紅色熒光蛋白相融合。Cdt1和geminin蛋白的降解是時間上調控的,這樣G1期只存在Cdt1,G1/S期存在兩種蛋白,而S、G2和M期只存在geminin。
因此,細胞核的熒光就從紅色(G1)變成綠色(S、G2、M),為監(jiān)控細胞周期進程提供了一種簡單的方法。FUCCI系統(tǒng)是基于BacMam 2.0技術,它利用桿狀病毒來實現(xiàn)哺乳動物細胞的轉導和瞬時表達。BacMam 2.0大大提高了這種基因導入平臺的效率和實用性。過去與BacMam 1.0不兼容的細胞類型(神經元),或轉導效果不佳(一些干細胞、CHO)的細胞類型,現(xiàn)在也能通過簡單的一步過程定量轉導。BacMam 2.0融合了新元件,大大增強了轉導效率和表達水平,故性能改善。
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor實現(xiàn)了細胞周期進程和細胞分裂的活細胞成像,它也與固定和透化處理兼容。這種細胞周期傳感器是即用型的,操作過程也很簡單——只需將Premo™ FUCCI試劑加入您的細胞,孵育過夜,并利用熒光顯微鏡或流式細胞儀觀察即可。
Click-iT® EdU assay則是我們常用的BrdU分析的替代。在DNA合成過程中,核苷類似物EdU(5-乙炔-2’-脫氧尿苷)摻入新生的DNA鏈中。EdU不是通過抗體檢測,而是基于一個click反應——銅催化的疊氮化物和炔烴之間的共價反應。EdU核苷中含有炔烴,而Alexa Fluor或Pacific Blue熒光基團上含有疊氮化物。利用成像技術、流式細胞術或高內涵分析即可判定群體中S期細胞的比例。Click-iT® EdU標記的一個主要優(yōu)勢在于熒光疊氮化物(分子量<~1,000)的體積遠小于BrdU抗體(分子量~150,000),這樣EdU可在溫和條件下?lián)饺?,保留了抗原完整性,從而實現(xiàn)了下游的抗體分析。與BrdU檢測需要苛刻條件不同,Click-iT®檢測試劑只需要標準的固定和透化即可。
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor讓細胞周期分析可在活細胞中開展,它與延遲成像結合時特別有用。對于固定細胞的成像,Click-iT® EdU標記實現(xiàn)了溫和條件下?lián)饺隕dU的檢測
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