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上海酶聯(lián)生物研究所
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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：299發(fā)布時(shí)間：2012-11-5
在甲基化分析中，亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化通常是必經(jīng)之路。它將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化成*，而甲基化的胞嘧啶保持不變，之后再結(jié)合PCR、測序等技術(shù)分析甲基化狀態(tài)。聽上去似乎很簡單，但要想獲得漂亮的結(jié)果，卻并非那么容易。轉(zhuǎn)化效率如何？回收率如何？這都是需要考量和優(yōu)化的因素。zui近，QIAGEN推出了一款新產(chǎn)品EpiTect Methyl II PCR Array System，無需亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，即可快速準(zhǔn)確地檢測單個(gè)基因或一組基因的DNA甲基化狀態(tài)。
EpiTect Methyl II PCR Array System采用創(chuàng)新的MethylScreen技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了單個(gè)基因以及疾病和通路聚焦的一組基因中CpG島DNA甲基化的快速準(zhǔn)確檢測。此技術(shù)無需亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。通過一步簡單的限制性內(nèi)切酶消化以及實(shí)時(shí)定量PCR，22個(gè)或94個(gè)不同基因的DNA甲基化水平可利用DNA Methylation PCR Array同時(shí)分析。MethylScreen技術(shù)是由Orion Genomics公司在2007年開發(fā)的。1這種方法是基于甲基化敏感（MSRE）和/或甲基化依賴（MDRE）的限制性內(nèi)切酶切割后的DNA檢測。這兩種酶分別消化未甲基化和甲基化的DNA。消化之后，通過實(shí)時(shí)定量PCR定量每個(gè)酶切反應(yīng)中剩余的DNA。利用ΔCt法將每個(gè)消化產(chǎn)物與mock（未添加酶）對照比較，從而確定甲基化和未甲基化DNA的相對量。操作過程的簡單讓此技術(shù)高度適合DNA甲基化圖譜分析以及多個(gè)領(lǐng)域的生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)，如干細(xì)胞分化和發(fā)育。
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