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PCR技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：1118 發(fā)布時(shí)間：2016-12-23
PCR: Polymerase chain reaction，即聚合酶鏈反應(yīng)。是80年代中期發(fā)展起來(lái)的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。
PCR技術(shù)的發(fā)展歷史
1985年關(guān)于PCR 的文章由美國(guó)科學(xué)家Kary Mullis等人在 《Science》雜志上發(fā)表 。
1989年《Science》雜志報(bào)道了耐熱性DNA多聚酶 Taq酶（生活在溫泉中的水生嗜熱桿菌內(nèi)提取到的一種耐熱的DNA聚合酶 ）的發(fā)現(xiàn),預(yù)示著分子時(shí)代的到來(lái)。12月《Science》雜志將PCR和它所使用的聚合酶命名為*個(gè)“年度分子”。
1993年Kary Mullis 因PCR的發(fā)明獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。
PCR技術(shù)的原理
遺傳物質(zhì)由細(xì)胞核、染色體、DNA（脫氧核糖核酸和磷酸鏈和堿基構(gòu)成)、堿基（A、T、C、G）是按雙鏈螺旋排列的，堿基序列的長(zhǎng)度和排列的順序決定了生物的多樣性。比如人類體細(xì)胞中共有31億個(gè)堿基對(duì)，按上述的0.1%的差，人和人之間有3百萬(wàn)個(gè)堿基對(duì)的差別。
PCR的基本工作原理就是以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對(duì)分別與模板互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復(fù)制的機(jī)理沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成。
PCR反應(yīng)的基本成分包括7種基本成分：模板DNA、特異性引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、脫氧核苷三磷酸（dNTP）、二價(jià)陽(yáng)離子、緩沖液及一價(jià)陽(yáng)離子。基本反應(yīng)步驟 ：變性--退火--延伸。zui后通過(guò)染料如EB染色DNA后在紫外燈下顯色檢出。
PCR技術(shù)的注意事項(xiàng)
1、防止污染，建立良好的質(zhì)量控制。操作時(shí)避免氣溶膠產(chǎn)生，特別注意陽(yáng)性樣品的拿放，使用一次性耗材，穿戴手套并經(jīng)常更換，永遠(yuǎn)在zui后一步才加核酸，液體分裝使用等。
2、引物設(shè)計(jì)合理。
3、Taq酶擴(kuò)增錯(cuò)誤率較高，大約1/100對(duì)堿基/20個(gè)循環(huán)。
4、鎂離子濃度對(duì)反應(yīng)效率的影響。
5、儀器穩(wěn)定性，升降溫速率，管子的密合度等。
6、RT-PCR注意防止RNA降解。