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影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法來自Transhold跳轉(zhuǎn)到:導(dǎo)航,搜索ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在科研上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。下面將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下：操作步驟：目錄[隱藏]1選擇試劑：2標(biāo)本收集與保存：3試劑使用中的準(zhǔn)備工作及注意事項：4加樣：5溫育：6洗板：7顯色：8終止：9讀板：10全過程：11ELISA實驗的結(jié)果判斷和數(shù)據(jù)分析選擇試劑：選擇質(zhì)
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免疫組化中抗體選擇要求1、一抗選擇要點（1）選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一特異抗原決定簇結(jié)合，就象導(dǎo)彈地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個抗原決定簇，在機體內(nèi)也可以由好幾種克隆產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對較低；而多克隆抗體特異性稍弱，抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等有所避免）。（2）種屬來源。一般家
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斐林試劑:成分:0.1g/mlNaOH（甲液）和0.05g/mlCuSO4（乙液）.用法:將斐林試劑甲液和乙液等體積混合,再將混合后的斐林試劑倒入待測液,水浴加熱或直接加熱,如待測液中存在還原糖,則呈磚紅色.班氏糖定性試劑:為藍(lán)色溶液.和葡萄糖混合后沸水浴會出現(xiàn)磚紅色沉淀.用于尿糖的測定.雙縮脲試劑:成分:0.1g/mlNaOH（甲液）和0.01g/mlCuSO4（乙液）.用法:向待測液中先加入2ml甲液,搖勻,再向其中加入3~4滴乙液,搖勻.如待測中存在蛋白質(zhì),則呈現(xiàn)紫色.蘇丹Ⅲ:用法:取蘇丹
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ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。1．樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會產(chǎn)生很強的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)
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酶標(biāo)記物包括酶標(biāo)記抗原、酶標(biāo)記抗體和酶標(biāo)記SPA等。酶標(biāo)記物質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到免疫酶技術(shù)的成功與否，因此被稱為關(guān)鍵的試劑。酶標(biāo)記物中zui常用的是酶標(biāo)記抗體，它是將酶與特異性抗體經(jīng)適當(dāng)方法連接而成。酶標(biāo)記抗體的質(zhì)量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質(zhì)量的酶（如辣根過氧化物酶，簡稱HRP）國內(nèi)已有商品供應(yīng)。高質(zhì)量的抗體則可通過提取純化而獲得。在制備方法上，宜選用產(chǎn)率高、不影響結(jié)合物的活性和不混雜干擾性物質(zhì)且操作簡便易行的方法。一、工作濃度的選擇在免疫酶
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1.1基本概念1.1.1質(zhì)量控制（QuailityControl,Q.C）質(zhì)量控制是監(jiān)視全過程，排除誤差，防止變化，維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個管理過程。這一過程是通過一個反饋環(huán)路進(jìn)行的。1）確定控制的對象；2）規(guī)定控制對象的標(biāo)準(zhǔn)（預(yù)期值）；3）制定或選擇控制方法和手段；3）測量實際數(shù)據(jù)；4）比較或較對實際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異，并說明產(chǎn)生這一差異的原因。超出預(yù)定誤差范圍，報警系發(fā)出信號，反饋通道中斷。5）采取行動，解決差異?；謴?fù)原狀（原標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)）的手段發(fā)揮作用。質(zhì)量控制主要采用質(zhì)控圖進(jìn)行。質(zhì)控圖是把某
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小鼠二酰基甘油（DAG/DG）ELISA試劑盒說明書預(yù)期應(yīng)用ELISA法定量測定小鼠血清、血漿、組織勻漿或其它相關(guān)生物液體中DAG含量。實驗原理用純化的DAG抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的DAG抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物（TMB）顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的DAG呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（值），計算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1、酶標(biāo)板：一塊（
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SYSTEMS®中文說明書UNIONHONEST酶聯(lián)免疫吸附測試EnzymelinkedlmmunosorbentAssay_____________________________________________________________________________________雞（Chicken）干擾素-y（IFN-y）ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用試驗原理：IFN-Y試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知IFN-Y濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)
