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山羊痘抗體（ Pox-Ab）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
2pg/ml-60pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定山羊血清、血漿及相關液體樣本中山羊痘抗體（ Pox-Ab）含量。實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中山羊痘抗體（ Pox-Ab）水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入山羊痘抗體（ Pox-Ab），再與 HRP標記的抗原結合，形成抗原 -抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物 TMB顯色。 TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的山羊痘抗體（ Pox-Ab）呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（ OD值），通過標準曲線計算樣品中山羊山羊痘抗體（ Pox-Ab）濃度。試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（ 120pg/ml） 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔 × 8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑 A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑 B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于 -20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。操作步驟
1.
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.
加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.
溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
4. 配液：將
30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復 5次，拍干。
6.
加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同
3。
8. 洗滌：操作同
5。
9.
顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色15分鐘.
10.
終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.
測定：以空白空調零， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應在加終止
60pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入 150μl標準品稀釋液
30pg/ml 4號標準品 150μl的 5號標準品加入 150μl標準品稀釋液
15pg/ml 3號標準品 150μl的 4號標準品加入 150μl標準品稀釋液
7.5pg/ml 2號標準品 150μl的 3號標準品加入 150μl標準品稀釋液
3.75pg/ml 1號標準品 150μl的 2號標準品加入 150μl標準品稀釋液
液后 15分鐘以內進行。操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注意事項
1．
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．
濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．
各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．
請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．
底物請避光保存。
7．
嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準 .
8．
所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．
本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；
2-8℃。
2．有效期：
6個月
