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ELISA試劑盒比色結(jié)果的表達(dá)方法

時間:2016-8-25閱讀:934
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ELISA試劑盒比色結(jié)果的表達(dá)方法以往通用光密度(oplical density,OD),現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence,A),兩者含義相同。通常的表示方法是,將吸收波長寫于A字母的右下角,如OPD的吸收波長為492nm,表示方法為"A492nm"或"OD492nm"。
酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀,通常指于測讀ELISA試劑盒結(jié)果吸光度的光度計。針對固相載體形式的不同,各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可到0.00,準(zhǔn)確性為±%,重復(fù)性達(dá)0.5%。舉例說,若某孔測得的A值為.083,則該孔相對于空氣的真實(shí)A值應(yīng)為.083±0.0(.073~.093),重復(fù)測定數(shù)次,其A值均應(yīng).083±0.05(.078~.088)在之間。酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,新型號的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900,甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同,線性范圍常小于可測范圍,比如某一酶標(biāo)儀的可測范圍為0.000~2.900,而其線性范圍僅0.000~2.000,這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)予注意。
酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下,操作時室溫宜在5~30℃,使用前先預(yù)熱儀器5-30分鐘,測讀結(jié)果更穩(wěn)定。
測讀A值時,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm波長。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W),第二次在不敏感波長(W2),兩次測定間不移動ELISA試劑盒板的位置。例如OPD用492nm為W,630nm為W2,zui終測得的A值為兩者之差(W-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

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