肺腺鱗癌（adnosqumous cell carcinoma, ASC）屬于非小細(xì)胞肺癌中預(yù)后較差的一種，以鉑類為基礎(chǔ)的*藥物一直以來都是ASC的主要治療手段。隨著針對腫瘤內(nèi)基因變異產(chǎn)生的個體治療方案，例如使用*激酶抑制劑或者ALK抑制劑；以及免疫監(jiān)測點(diǎn)阻斷治療方法的研發(fā)，例如近年來FDA在美國批準(zhǔn)的程序性死亡因子1（PD-1）抗體藥物pembrolizumab，使得非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的治療有了更多的選擇用藥方案。PD-1以及其配體PD-L1屬于免疫監(jiān)測點(diǎn)蛋白，分別在免疫炎癥細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。在健康的個體內(nèi)，PD-1和PD-L1參與抑制T細(xì)胞活性防止組織自身免疫反應(yīng)；但由于腫瘤中過表達(dá)這些免疫監(jiān)測點(diǎn)蛋白，可以使腫瘤細(xì)胞逃過T細(xì)胞監(jiān)控的腫瘤殺傷反應(yīng)。在抗PD-1/PD-L1治療的臨床實驗中，病人的無進(jìn)展生存期（PFS）和整體生存期（OS）在使用pembrolizumab治療NSCLC組均優(yōu)于單純使用*藥物組。與此同時人們發(fā)現(xiàn)在未經(jīng)分類的NSCLC病人中僅約有20%的病人對抗PD-1/PD-L1抗體藥物治療有效。因而在臨床上有必要篩選對治療敏感的病人，一方面可以提高治療的有效性，另一方面也可以避免非藥物敏感類病人接受PD-1/PD-L1治療后所引起的副作用以及可能誘導(dǎo)出的自身免疫反應(yīng)。

在這篇文獻(xiàn)中，該研究團(tuán)隊通過使用羅氏Ventana的特異性單克隆抗體（SP263）以及ACD公司的RNAscope原位雜交技術(shù)首先檢測了87例肺腺鱗癌（ASC）組織樣本內(nèi)的PD-L1 mRNA和蛋白的表達(dá)情況。使用IHC檢測到的PD-L1表達(dá)陽性率為39.22%，使用RNAscope檢測到的陽性率為37.25%。兩種方法檢測結(jié)果沒有區(qū)別（圖1）。兩者的檢測一致性幾近（κ-coefficient為0.851），統(tǒng)計學(xué)分析顯示兩種方法沒有顯著性差異（P=1.000）。

圖示：肺腺鱗癌內(nèi)PD-L1表達(dá)檢測結(jié)果。(a) 使用免疫組化方法檢測PD-L1獲得的陽性結(jié)果(x100) (b) 使用免疫組化方法檢測PD-L1獲得的陰性結(jié)果(x100) (c) 使用RNAscope原位雜交法檢測PD-L1獲得的陽性結(jié)果 (x100) (d) 使用RNAscope原位雜交法檢測PD-L1獲得的陰性結(jié)果 (x100)。         

接著在對腺鱗癌的腺癌和鱗癌部分進(jìn)行區(qū)分統(tǒng)計分析時，發(fā)現(xiàn)PD-L1表達(dá)在兩者中存在顯著性差異（P=0.017）：在腺癌內(nèi)，PD-L1的表達(dá)陽性率為11.11%，在鱗癌部分的陽性率為38.89%。前者與133例肺腺癌中統(tǒng)計得到的PD-L1表達(dá)率13.53%相似，而后者與83例肺鱗癌統(tǒng)計得到的PD-L1表達(dá)陽性率28.92%相似。

本研究繼續(xù)對比了腺鱗癌內(nèi)PD-L1的陽性表達(dá)與臨床病理特性的關(guān)系，結(jié)果顯示PD-L1的表達(dá)與病人性別、年齡、吸煙、腫瘤體積、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜侵犯、復(fù)發(fā)和死亡無關(guān)，但與淋巴血管侵犯有顯著相關(guān)性（P=0.016）。與EGFR，KRAS和ALK突變相比，PD-L1的表達(dá)與其沒有相關(guān)性。

在文章的討論中，作者闡述了對比使用RNAscope方法檢測PD-L1 mRNA以及使用免疫組化方法檢測PD-L1蛋白的目的：在臨床上存在不同公司提供的特定克隆號的抗體可對病人樣本進(jìn)行檢測，而每個抗體又有各自的cutoff值對結(jié)果進(jìn)行評估。在未來的臨床病人篩選過程中，需要一種可以不區(qū)分抗體公司抗體克隆號而可定篩查全部病人樣本的檢測方法。由于基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄得到mRNA，繼而翻譯成蛋白質(zhì)，因而如果能夠在mRNA水平對PD-L1進(jìn)行檢測，則將解決這一需求。故首先需要對兩者的檢測一致性進(jìn)行分析。本研究之初對比了RNAscope原位雜交方法與IHC免疫組化法在肺腺鱗癌病人標(biāo)本內(nèi)測到的PD-L1的表達(dá)比率。結(jié)果顯示兩種方法一致性接近*。這一結(jié)果為今后的臨床篩選用藥病人的檢測方法提供了基礎(chǔ)的臨床數(shù)據(jù)。

RNAscope技術(shù)是由美國Advanced Cell Diagnostics (ACD)公司研發(fā)的RNA原位雜交產(chǎn)品，在近年來的生物檢測領(lǐng)域發(fā)展迅速。與傳統(tǒng)的RNA原位雜交相比，RNAscope技術(shù)屬于新一代RNA原位雜交技術(shù)，其特異性的雙Z探針設(shè)計避免了傳統(tǒng)長鏈RNA探針的弊端，配以自身級聯(lián)放大檢測原理，可以敏感地檢測到目標(biāo)RNA。該技術(shù)優(yōu)勢如下：
  
1.應(yīng)用廣泛；
2.高特異性；
3.*靈敏度，單分子可視化和單細(xì)胞定量；
4.兼容降解的RNA樣本；
5.無需RNase-free操作和環(huán)境要求，一天完成實驗；
6.檢測結(jié)果穩(wěn)定一致性，兼容高通量自動化平臺；
7.多通道多靶點(diǎn)同時檢測。
  
Reference:
Sci Rep. 2017 Apr 7;7:46209. doi:10.1038/srep46209. PD-L1 expression in lung adenosquamous carcinomas compared with the more common variants of non-small cell lung cancer. Shi X, Wu S, Sun J, Liu Y, Zeng X, Liang Z.

RNAscope技術(shù)不但能夠進(jìn)行腫瘤組織中標(biāo)志物的原位檢測，而且在神經(jīng)生物學(xué)上也有著廣泛的應(yīng)用，該技術(shù)實現(xiàn)了對大腦組織等神經(jīng)標(biāo)本的原位定量和定位分析，結(jié)果清晰準(zhǔn)確。