常見免疫組化染色的兩種方法。南京信帆生物代做免疫組化實(shí)驗(yàn)，咨詢！

免疫組化雙染色法。

1.切片脫蠟至水。

2.0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。

3.水洗。

4.抗原修復(fù)。

5.PBS洗3次，每次1分鐘。

6.加入非免疫性動(dòng)物血清，孵育10分鐘。

7.PBS洗3次，每次2分鐘。

8.加入*抗體孵育60分鐘。

9.PBS洗3次，每次2分鐘。

10.加入生物素化的第二抗體，孵育10分鐘。

11.PBS洗3次，每次2分鐘。

12.加入鏈卵蛋白素過氧化物酶孵育10分鐘。

13.PBS洗3次，每次2分鐘。

14.加入DAB-H2O2孵育5-10分鐘。

15.PBS洗3次，每次2分鐘。

16. 加入雙染增強(qiáng)液，孵育10分鐘。

17. 加入非免疫性動(dòng)物血清孵育10分鐘。

18. PBS洗3次，每次2分鐘。

19. 加入選用的第二種抗體孵育60分鐘。

20. PBS洗3次，每次2分鐘。

21. 加入生物素標(biāo)記的第二抗體孵育10分鐘。

22. PBS洗3次，每次2 分鐘。

23. 加入鏈卵蛋白素堿性酶孵育10分鐘。

24. PBS洗3次，每次2分鐘。

25. 加入AEC溶液，孵育5-10分鐘。

26. 自來(lái)水洗。

27. 蘇木素染核5-10分鐘。

28. 水性封片。

注：1.*種復(fù)合物也可先用鏈卵蛋白素堿性酶。

2.第1次顯色也可用BCIP/NBT溶液，顏色為藍(lán)黑色，但應(yīng)與蘇木素鑒別。

免疫組化的雙染色法(ⅱ) (Immuno-histochemistry double staining method)

1.切片脫蠟至水。

2.0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。

3.水洗。

4.抗原修復(fù)。

5.PBS洗3次，每次1分鐘。

6.加入選用的*抗體孵育30-60分鐘。

7.PBS洗3次，每次2分鐘。

8.加入增強(qiáng)劑孵育20-30分鐘。

9.PBS洗3次，每次2分鐘。

10.加入酶標(biāo)抗兔/鼠，復(fù)合物，孵育

11.PBS洗3次，每次2分鐘。

12.加入DAB-H2O2孵育5-10分鐘

13.PBS洗3次，每次2分鐘。

14.加入選用的第二種抗體孵育60分鐘。

15.PBS洗3次，每次2分鐘。

16. 加入增強(qiáng)劑孵育20-30分鐘。

17. PBS洗3次，每次2分鐘。

18. 加入酶標(biāo)抗兔/鼠堿性酶復(fù)合物孵育20-30分鐘。

19.PBS洗3次，每次2分鐘。

20.加入AEC溶液孵育5-10分鐘。

21.自來(lái)水洗。

22.蘇木素染核5-10分鐘。

23.水性封片。